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新規蛍光化合物およびそれを用いた細胞内コレステロールの検出方法 新技術説明会

国内特許コード P08P005679
整理番号 IP18-061
掲載日 2008年11月7日
出願番号 特願2007-110515
公開番号 特開2008-266192
登録番号 特許第5229700号
出願日 平成19年4月19日(2007.4.19)
公開日 平成20年11月6日(2008.11.6)
登録日 平成25年3月29日(2013.3.29)
発明者
  • 吉原 利忠
  • 飛田 成史
  • 竹内 利行
  • 穂坂 正博
出願人
  • 国立大学法人群馬大学
発明の名称 新規蛍光化合物およびそれを用いた細胞内コレステロールの検出方法 新技術説明会
発明の概要

【課題】細胞内コレステロールの検出などに有用な、新規な蛍光化合物の提供。
【解決手段】下記一般式(I)で表される化合物。

nは2~5の整数、mは0~3の整数を示す。
【選択図】図1

従来技術、競合技術の概要


生体内のコレステロールの分布や動態を解析する上で、蛍光分光法は、高感度な分光法のため有用である。現在では、共焦点レーザー顕微鏡、二光子励起蛍光顕微鏡など測定機器が飛躍的に進歩し、高い時空間分解で分布や動態を解析することができる。しかしながらコレステロールは蛍光を示さないため、これらの技術を用いるためには、コレステロールに蛍光分子を標識させる必要があり、そのような蛍光性コレステロールが開発されている。ここで、重要な要素として、蛍光団を結合させてもコレステロール本来の性質を保持させなければならないことが挙げられる。
以下、これまで開発されている蛍光性コレステロールおよびそれらの問題点を示す。デヒドロエルゴステロール(下記化合物A)はコレステロールに分子構造が類似しているため内因性コレステロールに近い性質を有する。しかしながら,蛍光強度が弱いため精度の高い解析が困難である。Molecular Probes社(米国)において、コレステロールの3位のヒドロキシル基をエステル化して蛍光団を組み込んだ化合物(下記化合物B)が販売されている。しかしながら、細胞内に存在するコレステロールは3位のヒドロキシル基が遊離して存在しており、細胞内コレステロールの動態解析には不向きである。また、同社はコレステロールの22位にニトロベンゾフラザンを置換した化合物(下記化合物C)を市販している。しかしながら、化合物Cはミトコンドリアの膜に特異的に集積してしまいコレステロールの性質を保持していないことが報告されている[非特許文献1]。近年、コレステロールの7位にダンシルヒドラゾンを結合させた化合物(下記化合物D)が開発されている。Dは内因性コレステロールの性質に近いことが報告されており、蛍光性コレステロールアナログとして使用されている[非特許文献2]。
【化学式1】

【非特許文献1】S. Mukherjee, X. Zha, I. Tabas, and F. R. Maxfield, Biophys. J., 1998, 75, 1915.

【非特許文献2】V. Wiegand, T. Y. Chang, J. F. Strauss, III, F. Fahrenholz, G. Gimpl, FASEB J. , 2003, 17, 782.

産業上の利用分野


本発明は新規蛍光化合物に関する。本発明はまた、当該化合物を用いた細胞内コレステロール検出法および検出キットに関する。

特許請求の範囲 【請求項1】
下記一般式(I)で表される化合物。
【化学式1】



nは、mは0~3の整数を示す。

【請求項2】
nが2であり、mが0である、請求項1に記載の化合物。

【請求項3】
請求項1または2に記載の化合物を単離された細胞に添加し、蛍光を測定することを特徴とする、細胞内コレステロールの検出方法。

【請求項4】
前記化合物をmethyl-β-cyclodextrinとともに溶解して単離された細胞に添加することを特徴とする、請求項3に記載の方法。

【請求項5】
請求項1または2に記載の化合物を含む、コレステロール検出キット。

【請求項6】
さらにmethyl-β-cyclodextrinを含む、請求項5に記載のキット。
産業区分
  • 有機化合物
  • 微生物工業
  • 治療衛生
  • 試験、検査
国際特許分類(IPC)
Fターム
画像

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JP2007110515thum.jpg
出願権利状態 権利存続中
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