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酸化ストレス耐性を付与した乳酸菌及び新規発現ベクターを用いたタンパク質生産システム

国内特許コード P09A015219
掲載日 2010年3月5日
出願番号 特願2007-207287
公開番号 特開2009-039032
登録番号 特許第5317081号
出願日 平成19年8月8日(2007.8.8)
公開日 平成21年2月26日(2009.2.26)
登録日 平成25年7月19日(2013.7.19)
発明者
  • 島 純
  • 萩 達朗
  • 川本 伸一
出願人
  • 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構
発明の名称 酸化ストレス耐性を付与した乳酸菌及び新規発現ベクターを用いたタンパク質生産システム
発明の概要

【課題】酸化ストレス存在下で培養した場合であっても、大量に異種タンパク質を生産できる改変乳酸菌を提供する。
【解決手段】カタラーゼなどをコードする遺伝子である、酸化ストレス消去系遺伝子を導入し酸化ストレス耐性を付与した乳酸菌(例えば、Lactococcus属またはLactobacillus属に属する乳酸菌など)、およびその乳酸菌を作製するための発現カセット、ならびに、そのような乳酸菌を使用するタンパク質生産システムおよびタンパク質生産方法。
【選択図】なし

従来技術、競合技術の概要


乳酸菌は、安全性の高い微生物と認識されており、有用タンパク質生産や医療用ワクチンの輸送体等としての利用が期待されている。特に、Lactococcus属およびLactobacillus属乳酸菌は、豊富な食経験から安全性の高い微生物と捉えられており、発酵食品等の食品製造における最重要な微生物である。また、これら乳酸菌は、タンパク質・ペプチドや乳酸等の有用物質生産システムの宿主として、およびワクチンやサイトカイン等を発現させた医療用物質輸送体として期待されている。



しかし、乳酸菌は酸化ストレスの消去能が欠如しており、実用過程で負荷される酸化ストレスによりタンパク質生産用の宿主としての機能が制限される。なぜならば、乳酸菌の利用過程、すなわち、培養過程や生体内環境において、乳酸菌には酸化ストレスが負荷され、タンパク質生産用宿主としての機能が制限されるからである。そのため、乳酸菌に酸化ストレス耐性を付与することが可能になれば、乳酸菌の利用が高度化されるとともに、乳酸菌を用いたタンパク質生産システムの用途も飛躍的に拡大するものと考えられる。



微生物を宿主としたタンパク質の生産は、主に大腸菌、枯草菌(特許文献1および2)、酵母(特許文献3)等を宿主として行われてきた。乳酸菌を宿主とするタンパク質生産も試みられてきたが(特許文献4~6)、単に発現用ベクターの発明に留まっている。また、乳酸菌の酸素ストレス耐性に関与する遺伝子も見出されているが(特許文献7)、その遺伝子産物を異種タンパク質生産へ応用することは検討されていない。



この出願の発明に関連する先行技術文献情報としては、次のものがある。

【特許文献1】特開2007-130012

【特許文献2】特開2006-296242

【特許文献3】特開2004-81222

【特許文献4】特開2006-262724

【特許文献5】特開2001-340090

【特許文献6】特開2004-511248

【特許文献7】特開2001-327292

産業上の利用分野


本発明は、酸化ストレス耐性を付与した乳酸菌、およびその乳酸菌を作製するための発現カセット、ならびに、そのような乳酸菌を使用するタンパク質生産システムおよびタンパク質生産方法に関する。

特許請求の範囲 【請求項1】
酸化ストレス条件下で外来遺伝子を発現するための乳酸菌であって、配列番号1に記載の核酸配列と少なくとも90%相同な配列を含む核酸であって、スーパーオキシドディスムターゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸、配列番号2に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードする核酸、および、配列番号2に記載のアミノ酸配列に1または数個の欠失、付加、または、置換を含むアミノ酸配列からなるポリペプチドであって、スーパーオキシドディスムターゼ活性を有するポリペプチドをコードする核酸、からなる群から選択される核酸が導入されている乳酸菌に、α-アミラーゼ発現カセットを導入して発現させる、α-アミラーゼの生産方法。

【請求項2】
前記乳酸菌が、Lactococcus属またはLactobacillus属に属する乳酸菌である、請求項1に記載のα-アミラーゼの生産方法
産業区分
  • 微生物工業
国際特許分類(IPC)
Fターム
画像

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出願権利状態 権利存続中


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