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植物への高効率遺伝子導入能を付与したアグロバクテリウム菌

国内特許コード P170013769
整理番号 (S2013-0518-N0)
掲載日 2017年3月15日
出願番号 特願2014-560812
出願日 平成26年2月7日(2014.2.7)
国際出願番号 JP2014052844
国際公開番号 WO2014123208
国際出願日 平成26年2月7日(2014.2.7)
国際公開日 平成26年8月14日(2014.8.14)
優先権データ
  • 特願2013-023726 (2013.2.8) JP
発明者
  • 江面 浩
  • 中村 幸治
  • 野中 聡子
  • 染谷 龍彦
  • 周 莎
出願人
  • 国立大学法人 筑波大学
発明の名称 植物への高効率遺伝子導入能を付与したアグロバクテリウム菌
発明の概要 本発明は、遺伝子導入効率を向上させたアグロバクテリウム菌に関する。外来性のGABAアミノ基転移酵素遺伝子を保持する、向上した遺伝子導入効率を示す形質転換アグロバクテリウム菌、及びそれを用いた形質転換植物の作製方法が提供される。
従来技術、競合技術の概要


土壌細菌の一つであるアグロバクテリウム菌を介した植物への遺伝子導入法(アグロバクテリウム法)は、特別な技術や装置を必要とせず簡便な手順で行うことができる。アグロバクテリウム法では、遺伝子を完全な形でかつ少ないコピー数で植物に導入できる。このため、他の植物遺伝子導入法と比較して、形質転換植物の作製に高頻度に用いられている。しかしながら、アグロバクテリウム法による導入効率が低い植物種も多数存在する。そこで植物への遺伝子導入能力を促進したアグロバクテリウムの開発が望まれている。



アグロバクテリウム菌にエチレン生産を抑制する能力を付与するACCデアミナーゼ遺伝子を含むプラスミドを保持させることにより、植物への遺伝子導入効率を向上させたアグロバクテリウム菌(スーパーアグロバクテリウム)について報告されている(特許文献1、非特許文献1)。しかし様々なメカニズムに基づいて遺伝子導入効率を向上させるべく、遺伝子導入効率の高いアグロバクテリウム菌の開発は依然として望まれている。なお本発明者らは、アグロバクテリウム菌のゲノムの所定領域にACCデアミナーゼ遺伝子を組み込むことにより、アグロバクテリウム菌の遺伝子導入効率を安定して向上させる技術を開発している(特許文献2)。



ところで、GABA(γ-アミノ酪酸)は植物への傷害やアグロバクテリウム菌感染により植物内で生産される(非特許文献2)。また、GABA高生産植物はアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)C58株に対する感染感受性が低かったという報告がある(非特許文献3)。さらに、植物のGABAはアグロバクテリウム菌のクォーラムセンシングシグナルを抑制し、遺伝子導入に必要なTiプラスミドの複製や、アグロバクテリウム菌体間の水平伝搬を抑制することが知られている(非特許文献4及び5)。しかし植物のGABA活性を、アグロバクテリウム菌の改変により変化させることができるかどうか、またそれにより遺伝子導入効率を変化させることができるかどうかは知られていない。

産業上の利用分野


本件技術は、植物への遺伝子導入効率が向上したアグロバクテリウム菌及びその使用に関する。

特許請求の範囲 【請求項1】
外来性のGABAアミノ基転移酵素遺伝子を保持する、向上した遺伝子導入効率を示す形質転換アグロバクテリウム菌。

【請求項2】
外来性のACCデアミナーゼ遺伝子をさらに保持する、請求項1に記載の形質転換アグロバクテリウム菌。

【請求項3】
GABAアミノ基転移酵素遺伝子及び/又はACCデアミナーゼ遺伝子をベクター形態で保持する、請求項1又は2に記載の形質転換アグロバクテリウム菌。

【請求項4】
T-DNA領域を含むバイナリーベクターをさらに含有する、請求項1~3のいずれか1項に記載の形質転換アグロバクテリウム菌。

【請求項5】
GABAアミノ基転移酵素遺伝子が細菌由来である、請求項1~4のいずれか1項に記載の形質転換アグロバクテリウム菌。

【請求項6】
ACCデアミナーゼ遺伝子が細菌由来である、請求項1~5のいずれか1項に記載の形質転換アグロバクテリウム菌。

【請求項7】
請求項1~6のいずれか1項に記載の形質転換アグロバクテリウム菌を用いて、植物への遺伝子導入を行うことを特徴とする、形質転換植物の作製方法。

【請求項8】
植物が単子葉植物又は双子葉植物である、請求項7に記載の方法。

【請求項9】
単子葉植物がイネ科植物である、請求項8に記載の方法。

【請求項10】
双子葉植物がナス科植物である、請求項8に記載の方法。
国際特許分類(IPC)
Fターム
出願権利状態 公開
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