TOP > 国内特許検索 > ウシ由来c-Kitタンパク質に対するモノクローナル抗体とそれを用いた細胞分離法

ウシ由来c-Kitタンパク質に対するモノクローナル抗体とそれを用いた細胞分離法

国内特許コード P04A005291
掲載日 2005年1月11日
出願番号 特願平10-141635
公開番号 特開平11-335400
登録番号 特許第2997770号
出願日 平成10年5月22日(1998.5.22)
公開日 平成11年12月7日(1999.12.7)
登録日 平成11年11月5日(1999.11.5)
発明者
  • 彦野 弘一
  • 櫻井 通陽
  • 大田 方人
  • 窪田 宜之
  • 犬丸 茂樹
出願人
  • 農林水産省家畜衛生試験場長
発明の名称 ウシ由来c-Kitタンパク質に対するモノクローナル抗体とそれを用いた細胞分離法
発明の概要 本発明は、ウシ由来c-Kitタンパク質に特異的に反応するモノクローナル抗体と、そのモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ及び上記モノクローナル抗体を用いて、ウシ由来c-Kitタンパク質陽性細胞を含む試料からウシ由来c-Kitタンパク質陽性細胞を分離する方法に関するものである。本発明のモノクローナル抗体は例えば次の工程を経て製造することができる。1)抗原の調製、2)免疫及び抗体産生細胞の採取、3)細胞融合、4)ハイブリドーマの選択及びクローニング、5)モノクローナル抗体の採取。ウシ由来c-Kitタンパク質陽性細胞を含む試料から陽性細胞の分離は例えば次のように実施できる。本発明のモノクローナル抗体をビオチンで標識し、これをウシ由来c-Kitタンパク質陽性細胞を含む試料中に添加して、モノクローナル抗体と陽性細胞とを反応させる。これに蛍光標識したストレプトアビジンを添加し、上記ビオチン標識モノクローナル抗体と反応させた後、蛍光活性化セルソーター(FACS)を用いて蛍光染色陽性画分を分取することにより分離する。
従来技術、競合技術の概要 c-Kitタンパク質は、前ガン遺伝子(プロトオンコジーン)の一つであるc-kit遺伝子によってコードされるレセプター型タンパク質チロシンリン酸化酵素である。c-Kitタンパク質はc-Kitレセプター、Kitレセプター、SCFレセプター、又はCD117とも呼ばれている。かかるc-Kitタンパク質は、サイトカインの一つであるステムセルファクター(stem cell factor、以下「SCF」という) に対する細胞膜表面レセプターであることが既に報告されている。ヒト、マウス、ニワトリ、ヤギ、及びウシ由来のc-kitタンパク質をコードするcDNAは既にクローニングされ、その塩基配列が決定されている。その結果、c- Kitタンパク質がそのアミノ末端から順に、分泌シグナル配列、細胞外領域、細胞膜貫通領域、及び細胞内領域からなる細胞膜タンパク質であり、さらに細胞内領域の一部にc-Kitタンパク質の有するタンパク質チロシンリン酸化酵素活性を担う領域(リン酸化酵素領域)が存在することが明らかにされている。ヒトやマウスにおいて、c-Kitタンパク質が各種血液系細胞の前駆細胞(hematopoietic progenitor cells)、成熟マスト細胞、生殖細胞、メラニン形成細胞などの細胞膜表面に発現しており、SCFに対する細胞膜表面レセプターとして、これらのc-Kitタンパク質陽性細胞種の正常な増殖や分化にとって必須の役割を有していることが知られている。マウス由来c-Kitタンパク質に対するモノクローナル抗体及びヒト由来c-Kitタンパク質に対するモノクローナル抗体の作製に関しては既に報告されており、これらの抗体が血液前駆細胞、生殖細胞、メラニン形成細胞等のc-Kitタンパク質陽性細胞の同定や分離のために用いられている。しかし、これらモノクローナル抗体のウシ由来c-Kitタンパク質に対する反応性は未知である。ヒト等のc-Kitタンパク質に関する知見から、c-Kitタンパク質がウシにおいても血液前駆細胞、生殖細胞、メラニン形成細胞等の増殖にとって主要な役割を有していると考えられる。従って、ウシ由来c-Kitタンパク質の生物学的役割の解明がウシにおける上記細胞種の形成過程を明らかにする上で重要であると考えられる。c-Kitタンパク質の生物学的役割の解明においては、血液前駆細胞や生殖細胞等のc-Kitタンパク質陽性細胞種の分離手段が必要である。そして、ウシにおけるc-Kitタンパク質の動態や機能を調べるとともに、ウシの血液前駆細胞や生殖細胞等のc-Kitタンパク質陽性細胞を分離するためには、ウシ由来c-Kitタンパク質に対する特異性の高い抗体、特に特異性・再現性の点で優れているモノクローナル抗体の作製が必要である。しかし、これまでにウシ由来c-Kitタンパク質に対するモノクローナル抗体の作製は報告されていない。そこで、ウシ由来c-Kitタンパク質に対するモノクローナル抗体の開発が渇望されている。
産業上の利用分野 ウシ由来c-Kitタンパク質に特異的に反応するモノクローナル抗体、該モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ、及び該モノクローナル抗体を利用したウシ由来c-Kitタンパク質陽性細胞の分離方法
特許請求の範囲 【請求項1】 受託番号がFERM P-16780であるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体。
【請求項2】 請求項1記載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ。
【請求項3】 請求項1記載のモノクローナル抗体を用いて、ウシ由来c-Kitタンパク質陽性細胞を含む試料からウシ由来c-Kitタンパク質陽性細胞を分離することを特徴とするウシ由来c-Kitタンパク質陽性細胞の分離方法。
産業区分
  • 有機化合物
  • 微生物工業
国際特許分類(IPC)
Fターム
画像

※ 画像をクリックすると拡大します。

08850_02SUM.gif
出願権利状態 権利存続中


PAGE TOP

close
close
close
close
close
close
close