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UNDIFFERENTIATED CELL DETECTION METHOD

Foreign code F200010147
File No. (S2018-0734-N0)
Posted date Jun 2, 2020
Country WIPO
International application number 2019JP023599
International publication number WO 2019240247
Date of international filing Jun 14, 2019
Date of international publication Dec 19, 2019
Priority data
  • P2018-115025 (Jun 15, 2018) JP
Title UNDIFFERENTIATED CELL DETECTION METHOD
Abstract Provided is a marker gene capable of detecting the persistence/admixture of undifferentiated cells in a differentiated cell population. Undifferentiated cells present in a differentiated cell population are detected by using at least one gene selected from the group consisting of ESRG, VSNL1, THY1, SFRP2, SPP1, USP44, and CNMD as an undifferentiation marker. A method for detecting undifferentiated cells, a method of use as an undifferentiation marker, and an undifferentiated cell detection kit. Also provided is a method for selecting an undifferentiated cell line.
Outline of related art and contending technology BACKGROUND ART
Used in regenerative medicine iPS undifferentiated population of differentiated cells into/leaving the cell is detected, evaluating the risk of cancer is very important from the viewpoint. Up to this point, leaving the cell to detect tampering/iPS undifferentiated, quantitative PCR (qPCR) is a technique for evaluating iPS cell-specific genes by a method of detecting a (non-patent document 1), differentiated cells in culture undifferentiated cells due to the maintaining condition reculturing method (Non-Patent Document 2) has been reported.
In the prior art, the method reculturing, iPS cell colony from undifferentiated mixed to form a high accuracy because there is an advantage that the other hand, from 1 weeks to detect, using the quantitative PCR method is convenient, in view of excellent performed rapidly.
However, this is reported (Non-Patent Document 1) of the LIN28 organ/tissue of the differentiated cells with a low expression (retinal pigment epithelial cells) exists on the other hand, differentiated cells or iPS cells such as hepatocytes differentiated from the induced cells can be seen from the expression, various differentiated cells and undifferentiated iPS cells subject of the detection of the remaining mixed/may not be available if there is a problem.
Scope of claims (In Japanese)[請求項1]
分化細胞集団における、ESRG、VSNL1、THY1、SFRP2、SPP1、USP44及びCNMDよりなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の発現レベル及び/又はプロモーター活性を測定することを含む、未分化細胞を検出する方法。

[請求項2]
未分化細胞が、胚性腫瘍細胞(EC細胞)、胚性幹細胞(ES細胞)、人工多能性幹細胞(iPS細胞)又は胚性生殖細胞(EG細胞)であり、分化細胞集団が前記未分化細胞から分化した細胞の集団である請求項1記載の方法。

[請求項3]
分化細胞集団が、内胚葉、中胚葉又は外胚葉のいずれかの分化細胞の集団である請求項1又は2に記載の方法。

[請求項4]
内胚葉の分化細胞が、肝内胚葉細胞である請求項3記載の方法。

[請求項5]
中胚葉の分化細胞が、横中隔間充織細胞、間葉系細胞又は血管内皮細胞である請求項3記載の方法。

[請求項6]
外胚葉の分化細胞が、神経幹細胞、神経堤細胞又は神経細胞である請求項3記載の方法。

[請求項7]
遺伝子の発現レベルをmRNAの量又はタンパク質の量として測定する請求項1~6のいずれかに記載の方法。

[請求項8]
遺伝子の発現レベルをqPCR、デジタルPCR、免疫染色、in situ hybridization、RNAシークエンス、マイクロアレイ、NanoString、抗体アレイ、FlowCytometry又は質量分析で測定する請求項1~7のいずれかに記載の方法。

[請求項9]
未分化細胞株から分化誘導された内胚葉、中胚葉又は外胚葉のいずれかの分化細胞における、ESRG、VSNL1、THY1、SFRP2、SPP1、USP44及びCNMDよりなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の発現レベル及び/又はプロモーター活性を測定することによって、安全性の高い未分化細胞株を選別する方法。

[請求項10]
未分化細胞株が、胚性腫瘍細胞(EC細胞)株、胚性幹細胞(ES細胞)株、人工多能性幹細胞(iPS細胞)株又は胚性生殖細胞(EG細胞)株である請求項9記載の方法。

[請求項11]
未分化細胞株がiPS細胞株である請求項10記載の方法。

[請求項12]
分化細胞をモデル動物へ移植して形成された組織における、ESRG、VSNL1、THY1、SFRP2、SPP1、USP44及びCNMDよりなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の発現レベル及び/又はプロモーター活性を測定することを含む、未分化細胞を検出する方法。

[請求項13]
分化細胞集団中に存在する未分化細胞を検出するために、ESRG、VSNL1、THY1、SFRP2、SPP1、USP44及びCNMDよりなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子を未分化マーカーとして使用する方法。

[請求項14]
ESRG、VSNL1、THY1、SFRP2、SPP1、USP44及びCNMDよりなる群より選択される少なくとも1つの遺伝子の発現を検出可能な試薬及び/又はプロモーター活性を測定可能な試薬を含む、未分化細胞を検出するためのキット。

[請求項15]
遺伝子の発現を検出可能な試薬が、プライマー、プローブ又は抗体である請求項14記載のキット。

[請求項16]
遺伝子のプロモーター活性を測定可能な試薬が、プロモーター下流にレポータータンパク質を連結した遺伝子配列又はこの遺伝子配列を組み込んだベクターである請求項14記載のキット。
  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • YOKOHAMA CITY UNIVERSITY
  • Inventor
  • TANIGUCHI HIDEKI
  • SEKINE KEISUKE
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DJ DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IR IS JO JP KE KG KH KN KP KR KW KZ LA LC LK LR LS LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SA SC SD SE SG SK SL SM ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW KM ML MR NE SN ST TD TG
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