MEDICINE FOR PREVENTING OR TREATING TISSUE FIBROTIC DISEASES
| 外国特許コード | F210010275 |
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| 整理番号 | 6405 |
| 掲載日 | 2021年1月8日 |
| 出願国 | 世界知的所有権機関（ＷＩＰＯ） |
| 国際出願番号 | 2020JP007901 |
| 国際公開番号 | WO 2020175597 |
| 国際出願日 | 令和2年2月27日(2020.2.27) |
| 国際公開日 | 令和2年9月3日(2020.9.3) |
| 優先権データ |
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| 発明の名称 （英語） | MEDICINE FOR PREVENTING OR TREATING TISSUE FIBROTIC DISEASES |
| 発明の概要（英語） | Provided is a medicinal composition to be used for preventing and/or treating tissue fibrotic diseases. The medicinal composition according to the present invention, which comprises a PI3Kδ inhibitor as an active ingredient, exhibits excellent effects on tissue fibrosis in various organs and, therefore, can prevent and/or treat tissue fibrotic diseases. As an example of the PI3Kδ inhibitor, [(3S)-3-({6-[2-(difluoromethyl)-1H-benzoimidazol-1-yl]-2-(morpholin-4-yl)pyrimidin-4-yl}amino)pyrrolidin-1-yl](oxan-4-yl)methanone or a salt thereof may be cited. |
| 従来技術、競合技術の概要（英語） |
Background Art Tissue fibrosis is a bioadaptive response in the healing process of damaged tissue. Tissue fibrosis is mainly caused by abnormal growth of connective tissue in the tissue and excessive deposition of extracellular matrix such as collagen produced by fibroblasts. Scleroderma is a systemic disease mainly composed of inflammatory and fibrotic changes, mainly composed of vascular disorders. (Non-Patent Document 1 and Non-Patent Document 2), wherein various cytokines are considered to be involved in fibrosis mainly in TGF-/ S and IL-6. In addition, although the skin fat layer is decreased in the skin of a scleroderma patient, in recent years, skin fat cell precursor cells control skin myofibroblasts and fibrosis in scleroderma (Non-Patent Document 3), Serum of a scleroderma patient inhibits differentiation of adipose-derived stem cells (Ad i pose-i nduced stem ce l l s) into adipocytes, Non-Patent Document 4) has been shown to reduce expression of perlipin (pe r i l i p i n) and adiponectin (ad i ponect i n) which are markers of adipocytes and change them like myofibroblasts, and it is believed that recovery of skin adipocytes may contribute to suppression of fibrosis. Adiponectin is one of cytokines produced by adipocytes, such as adipocyte differentiation promoting action, anti-inflammatory action, antifibrotic action (Non-Patent Document 1, Non-Patent Document 5, Non-Patent Document 7), Non-Patent Document 6), and Non-Patent Document 7), and Non-Patent Document 7), which also suggests the relationship between the scleroderma pathology and adipose tissue. Although the pathology of scleroderma has been elucidated, the therapeutic method |
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| 国際特許分類(IPC) |
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| 指定国 |
National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DJ DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IR IS JO JP KE KG KH KN KP KR KW KZ LA LC LK LR LS LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SA SC SD SE SG SK SL ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN WS ZA ZM ZW ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW KM ML MR NE SN ST TD TG |
日本語項目の表示
| 発明の名称 | 組織線維化による疾患の予防又は治療のための医薬 |
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| 発明の概要 | 組織線維化による疾患の予防及び／又は治療に使用するための医薬組成物を提供する。本発明のPI3Kδ阻害剤を有効成分とする医薬組成物は、各種臓器における組織線維化に対して優れた効果を示し、組織線維化による疾患を予防及び／又は治療することができる。PI3Kδ阻害薬の一つとして、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩が挙げられる。 |
| 特許請求の範囲 |
[請求項1] 組織線維化による疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物。 [請求項2] PI3Kδ阻害作用を有する化合物又はその塩を有効成分として含有する組織線維化による疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物。 [請求項3] 化合物又はその塩が、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩である請求項２に記載の医薬組成物。 [請求項4] 医薬組成物が、製薬学的に許容される賦形剤をさらに含有することからなる医薬組成物である請求項２又は３に記載の医薬組成物。 [請求項5] 組織線維化が、肺、皮膚、心臓、食道、胃、腸、腎臓、肝臓、血管、膵臓、骨髄、乳腺、筋肉、腹膜、胸膜、甲状腺、リンパ節、関節、膀胱、気管壁、脂肪組織および結合組織より選択されるいずれか１種または複数種の組織における線維化である請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。 [請求項6] 組織線維化による疾患が、強皮症及び／又は臓器不全に伴う線維化による疾患である請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。 [請求項7] 組織線維化による疾患が、強皮症である請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。 [請求項8] 強皮症及び／又は臓器不全に伴う線維化による疾患が、肺線維症、肺高血圧症、皮膚硬化症、逆流性食道炎、強皮症腎クリーゼ、びまん皮膚硬化型全身性強皮症、限局型全身性強皮症及び自己免疫性疾患より選択されるいずれか１種または複数種の疾患である請求項６に記載の医薬組成物。 [請求項9] 強皮症及び／又は臓器不全に伴う線維化による疾患が、肺線維症又は肺高血圧症である請求項６に記載の医薬組成物。 [請求項10] 医薬組成物に含まれる有効成分が、 強皮症に伴う皮膚脂肪層の減少の抑制作用を有する、請求項７に記載の医薬組成物。 [請求項11] 医薬組成物に含まれる有効成分が、 皮膚線維芽細胞を脂肪細胞に分化誘導する作用を有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。 [請求項12] 組織線維化による疾患の予防若しくは治療用医薬組成物の製造のための、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩の使用。 [請求項13] 組織線維化による疾患の予防若しくは治療のための、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩の使用。 [請求項14] 組織線維化による疾患の予防若しくは治療に使用するための、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩。 [請求項15] [(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩の有効量を対象に投与することからなる、組織線維化による疾患の予防若しくは治療方法。 |
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| 明細書 |
技術分野 [0001] 本発明は組織線維化による疾患の予防又は治療のための医薬に関する。 [0002] 本出願は、参照によりここに援用されるところの日本出願特願2019-035081号優先権を請求する。 背景技術 [0003] 組織線維化とは、障害組織の治癒過程にみられる生体適応反応であるが、過剰に起こると正常組織を破壊し、臓器不全をもたらす。組織線維化は主に組織中の結合組織が異常に増殖し、線維芽細胞が産生するコラーゲン等の細胞外マトリックスが過剰に沈着することに起因すると考えられている。 [0004] 強皮症は、血管障害を中心に、炎症性、線維性変化を主体とする全身性の疾患で、手指より始まる皮膚の硬化病変に加え、肺線維症などの諸臓器の病変を伴う。線維化にはTGF-βやIL-6などを中心として種々のサイトカインが関わっていると考えられている（非特許文献１、非特許文献２）。また、強皮症患者皮膚では皮膚脂肪層が減少しているが、近年、皮膚脂肪細胞前駆細胞が強皮症における皮膚筋線維芽細胞と線維化を制御していること（非特許文献３）、強皮症患者の血清は脂肪由来幹細胞（Adipose-induced stem cells）の脂肪細胞への分化を抑制し、脂肪細胞のマーカーであるペリリピン（perilipin）及びアディポネクチン（adiponectin）の発現を低下させ、筋線維芽細胞様に変化させること（非特許文献４）が示されてきており、皮膚脂肪組織の回復が線維化抑制に寄与する可能性が考えられる。アディポネクチンは脂肪細胞の産生するサイトカインの一つで、脂肪細胞分化促進作用や抗炎症作用、抗線維化作用（非特許文献１、非特許文献５、及び非特許文献６）など多様な機能を有するが、強皮症患者の血液中では低下していることが報告され（非特許文献７）、これも強皮症病態と脂肪組織との関連を示唆している。このように強皮症の病態は明らかになりつつあるものの、未だ治療法は対症療法しかなく、根本的治療法の確立が求められている。 [0005] 組織線維化の機序の一つとして、ホスファチジルイノシトール-3-キナーゼ（PI3K）のリン酸化によるAktの活性化が、肺線維症（非特許文献８）、腎の線維化（非特許文献９）、皮膚の線維化（非特許文献１０）に関与していることが開示されている。また、PI3K阻害薬が、線維症、特に特発性肺線維症の治療に用いることができるとの報告がある（特許文献１）。特許文献２～６には、PI3Kδ選択的阻害薬の用途として免疫性障害に関連する疾患が各種列挙されており、その例として線維症や強皮症等への使用も挙げられているが、これらの特許文献には線維症や、強皮症の治療効果を示す実施例は一切示されていない。 [0006] 非特許文献１１には、PI3K/Akt/mTOR経路が強皮症に関与しており、PI3K/Akt/mTORシグナリング活性やmTORのシグナリング活性を阻害するBEZ235がin vitroや強皮症モデルマウス（bleomycin誘導モデル）を用いたin vivoの実験において抗線維化活性（anti-fibrotic activity）を示したことが開示されている。 [0007] 特許文献７には、PI3Kδ（Phosphatidylinositol-3-kinase delta）選択的阻害薬の一つとして下記化学式の化合物である、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン（表２２２、Ｅｘ．Ａ２９３）（以下、化合物１と記載することがある。）が開示されており、臓器移植における拒絶反応、アレルギー疾患、自己免疫疾患、血液腫瘍の予防／治療に用いることができることが示されている。しかしながら、特許文献７には線維化による疾患についての記載はない。 [化1] （省略） 先行技術文献 非特許文献 [0008] 非特許文献1 : Nature Reviews Rheumatology, 2014; 10, 706-719 非特許文献2 : J. Rheumatol., 2012; 39, 1120 非特許文献3 : Nature Reviews Rheumatology, 2017; 13, 71-72 非特許文献4 : J. Clin. Med., 2019; 8, 1256 非特許文献5 : J. Lipid. Res., 2005; 46, 1369-1379 非特許文献6 : Arthritis. Res. Ther., 2012; 14, R229 非特許文献7 : Exp. Dermatol., 2011; 20, 764-766 非特許文献8 : Int. J. Mol. Sci., 2018; 19, 778 非特許文献9 : J. Cell. Mol. Med., 2017; 21, 1248-1259 非特許文献10 : J. Invest. Dermatol., 2006; 126, 551-560 非特許文献11 : J. Dermatol Sci., 2014 Nov; 76(2): 104-111 特許文献 [0009] 特許文献1 : 国際公開WO2013/117503号公報 特許文献2 : 特開2017-186378号公報 特許文献3 : 国際公開WO2014/006572号公報 特許文献4 : 国際公開WO2012/126901号公報 特許文献5 : 国際公開WO2012/107465号公報 特許文献6 : 国際公開WO2008/064018号公報 特許文献7 : 国際公開WO2012/020762号公報 発明の概要 発明が解決しようとする課題 [0010] 医薬組成物、例えばPI3Kδ阻害作用を有する化合物又はその塩を有効成分として包含する、組織線維化による疾患の予防及び／又は治療に有用な医薬組成物を提供する。 課題を解決するための手段 [0011] 本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、化合物１又はその塩を含有する医薬組成物が、皮膚、肺、食道、腎臓などの組織線維化を抑制することを初めて見出し、本発明を完成した。 [0012] すなわち本発明は以下よりなる。 [0013] （１）組織線維化による疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物。 （２）PI3Kδ阻害作用を有する化合物又はその塩を有効成分として含有する組織線維化による疾患の予防及び／又は治療のための医薬組成物。 （３）化合物又はその塩が、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩である上記（２）に記載の医薬組成物。 （４）医薬組成物が、製薬学的に許容される賦形剤をさらに含有することからなる医薬組成物である上記（２）又は（３）に記載の医薬組成物。なお、当該医薬組成物は、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩を含有する組織線維化による疾患の予防及び／又は治療剤を包含する。 （５）組織線維化が、肺、皮膚、心臓、食道、胃、腸、腎臓、肝臓、血管、膵臓、骨髄、乳腺、筋肉、腹膜、胸膜、甲状腺、リンパ節、関節、膀胱、気管壁、脂肪組織および結合組織より選択されるいずれか１種または複数種の組織における線維化である上記（１）～（４）のいずれか１つに記載の医薬組成物。 （６）組織線維化による疾患が、強皮症及び／又は臓器不全に伴う線維化による疾患である上記（１）～（４）のいずれか１つに記載の医薬組成物。 （７）組織線維化による疾患が、強皮症である上記（１）～（４）のいずれか１つに記載の医薬組成物。 （８）強皮症及び／又は臓器不全に伴う線維化による疾患が、肺線維症、肺高血圧症、皮膚硬化症、逆流性食道炎、強皮症腎クリーゼ、びまん皮膚硬化型全身性強皮症、限局型全身性強皮症及び自己免疫性疾患より選択されるいずれか１種または複数種の疾患である上記（６）に記載の医薬組成物。 （９）強皮症及び／又は臓器不全に伴う線維化による疾患が、肺線維症又は肺高血圧症である上記（６）に記載の医薬組成物。 （１０）医薬組成物に含まれる有効成分が、 強皮症に伴う皮膚脂肪層の減少の抑制作用を有する、上記（７）に記載の医薬組成物。 （１１）医薬組成物に含まれる有効成分が、 皮膚線維芽細胞を脂肪細胞に分化誘導する作用を有する、上記（１）～（４）のいずれか１つに記載の医薬組成物。 （１２）組織線維化による疾患の予防若しくは治療用医薬組成物の製造のための、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩の使用。 （１３）組織線維化による疾患の予防若しくは治療のための、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩の使用。 （１４）組織線維化による疾患の予防若しくは治療に使用するための、[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩。 （１５）[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン又はその塩の有効量を対象に投与することからなる、組織線維化による疾患の予防若しくは治療方法。なお、「対象」とは、その予防又は治療を必要とするヒト又はその他の動物であり、ある態様としては、その予防又は治療を必要とするヒトである。 発明の効果 [0014] 本発明の医薬組成物は、線維症モデル動物において、皮膚スコア、脂肪層の割合評価の観点から優れた治療効果を示した。さらに組織学的には、例えば皮膚線維化、食道粘膜下層の線維化、腎糸球体硬化において優れた改善効果を示した。また、右心室の周囲長についても優れた改善効果を示した。また本発明の医薬組成物は、線維症モデル動物及びヒトの線維芽細胞に直接作用し、脂肪細胞に分化させることが示された。これにより、本発明の医薬組成物は、各種臓器における組織線維化に対して優れた効果を示すことが確認された。 図面の簡単な説明 [0015] [図1] 図１は、IKKβ flox/flox Sm22α-Cre +/-マウス（以下、明細書又は図中で、「KO」、「KOマウス」、「IKKβ-KO mice」と記載する場合がある。）にPI3Kδ阻害薬の一種である化合物１を投与したときの皮膚スコアによる評価結果を示す図である。化合物１の投与により皮膚スコアの上昇が抑制され、症状の改善効果が得られた。（実施例１） [図2] 図２は、KOマウスに化合物１を経口投与したときの表真皮における脂肪層の割合を確認した結果を示す図である。（実施例１） [図3] 図３は、KOマウスに化合物１を経口投与したときの表真皮における脂肪層の割合を確認した結果を示す写真図である。（実施例１） [図4] 図４は、KOマウスに化合物１を経口投与したときの肺高血圧症の程度を反映する右心室の周囲長で評価した結果を示す図である。（実施例２） [図5] 図５は、KOマウスに化合物１を経口投与したときの食道粘膜下層の線維化に対する改善効果を示すマッソン‐トリクローム（Masson Trichrome）染色組織図であり、矢印は粘膜下層線維化巣を示す。（実施例３） [図6] 図６は、KOマウスに化合物１を経口投与したときの腎臓糸球体硬化に対する改善効果を示すPAS染色組織図であり、矢印は糸球体を示す。（実施例３） [図7] 図７は、肺線維症モデルマウス（ブレオマイシン誘導）に化合物１を投与したときの肺の線維化の程度をAshcroftスコアにより評価した結果を示す図である。（実施例４） [図8] 図８は、KOマウスの皮膚線維芽細胞に化合物１を作用させた時のPPARγ、及びFABP4の発現増加を示すウェスタンブロットの結果を示す図である。（実施例５） [図9] 図９は、ヒト皮膚線維芽細胞に化合物１を作用させた時のPerilipinの発現増加を示すウェスタンブロットの結果を示す図である。（実施例６） [図10] 図１０は、強皮症患者の皮膚線維芽細胞に化合物１を作用させた時のPerilipinの発現増加を示すウェスタンブロットの結果を示す図である。（実施例７） 発明を実施するための形態 [0016] 以下、本発明を詳細に説明する。 本明細書において「組織線維化」とは、組織において結合組織が異常に増殖することである。例えば、障害組織の治癒過程にみられる生体適応反応である。しかし、膠原線維（コラーゲン）などの細胞外基質が過剰に蓄積することで、組織が硬くなり、正常組織を破壊し、臓器不全をもたらす。このように組織が硬くなる現象を硬化ともいう。本明細書において「組織線維化」は、組織に線維化が認められる限り適用され、いずれの部位での線維化であるか、いずれの疾患に起因する線維化であるか、又はいずれの疾患に至るかについては特に限定されない。組織線維化ではなく線維化ともいい、線維化と硬化に関して特に限定はない。 [0017] 本明細書において「組織線維化による疾患」とは、自己免疫疾患、膠原病、皮膚疾患、心疾患、呼吸器系疾患、食道疾患、胃腸疾患、肝疾患、腎疾患、脳神経疾患、眼疾患、骨髄疾患、癌、動脈硬化、肥満又は糖尿病等が挙げられる。例えば強皮症や、臓器不全に伴う線維症が挙げられる。本明細書における組織線維化は、組織に線維化が認められる限り、これらの疾患に限定されない。 [0018] 本明細書において「組織線維化」が、何れの組織に生じるかについては特に限定されないが、例えば肺、皮膚、心臓、食道、胃、腸、腎臓、肝臓、血管、膵臓、骨髄、乳腺、筋肉、腹膜、胸膜、甲状腺、リンパ節、関節、膀胱、気管壁、脂肪組織、結合組織のいずれか１種又は複数種の組織が挙げられる。ある態様としては、肺、皮膚及び心臓のいずれかの組織に係る線維化をいう。また、本明細書における組織線維化の原因や、組織線維化を伴う疾患についても特に限定されない。 [0019] 強皮症は、例えば、全身性強皮症（systemic sclerosis: SSc）や限局性強皮症に分類される。全身性強皮症は、血管障害を中心に、炎症性、線維性変化を主体とする全身性の疾患で、手指より始まる皮膚の硬化病変に加え、肺線維症などの諸臓器の病変を伴う。全身性強皮症は、さらに皮膚線維化（硬化）が前腕や躯幹にまで及ぶ、びまん皮膚硬化型全身性強皮症（diffuse cutaneous SSc: dcSSc）や、手指、顔面に限局する限局皮膚硬化型全身性強皮症（limited cutaneous SSc: lcSSc）に分類される。全身性強皮症の症状として、例えば皮膚症状では手指腫脹、皮膚硬化、色素沈着と脱失が挙げられ、末梢循環障害としてはレイノー現象、手指潰瘍、臓器障害としては、例えば肺動脈性肺高血圧症、心臓線維症などの心筋障害、消化管機能障害、間質性肺疾患、腎クリーゼなどが挙げられる。 [0020] 強皮症以外の組織線維化による疾患としては、例えば肝線維症やその素因をつくる炎症性疾患などが挙げられる。例えば急性又は慢性肝炎、胆道疾患及び中毒性肝損傷、糖尿病性腎症に起因する腎硬化症、骨髄線維症、膵臓線維症、創傷後瘢痕、血管形成術後再狭窄、動脈硬化症、動脈瘤、動脈石灰化症、大動脈弁狭窄症、虚血性心疾患、心筋症、関節炎、乳腺線維症、筋肉線維症、後腹膜線維症、甲状腺線維症、リンパ節線維症、膀胱線維症、胸膜線維症及び慢性閉塞性肺疾患（chronic obstructive pulmonary disease: COPD）、気管壁が筋線維芽細胞やコラーゲンの蓄積により線維化する全ての線維性組織が罹患する疾患が挙げられる。 [0021] 本明細書において、組織線維化の予防及び／又は治療に適用可能な医薬組成物の有効成分として、PI3Kδ選択的阻害剤が挙げられる。有効成分としてのPI3Kδ選択的阻害剤としては、具体的には化合物１又はその塩が挙げられる。 [0022] 本発明は化合物１又はその塩の製薬学的に許容されるプロドラッグを包含する。製薬学的に許容されるプロドラッグとは、加溶媒分解により又は生理学的条件下で、アミノ基、水酸基、カルボキシル等に変換できる基を有する化合物である。プロドラッグを形成する基としては、例えば、Prog. Med., 5, 2157-2161 (1985)や「医薬品の開発」（廣川書店、1990年）第７巻 分子設計163-198に記載の基が挙げられる。 [0023] 化合物１の塩とは、化合物１の製薬学的に許容される塩であり、具体的には、酸付加物塩（無機酸塩（塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩等）、有機酸塩（ギ酸、プロピオン酸、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳酸塩、マロン酸、コハク酸、リンゴ酸、マンデル酸、ジベンゾイル酒石酸、酒石酸塩、ジトルオイル酒石酸、シュウ酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、イセチオン酸塩、グルクロン酸塩、グルコン酸塩、アスパラギン酸、グルタミン酸等）等、が挙げられる。 [0024] 本発明の医薬組成物に有効成分として含まれる化合物１又はその塩は、PI3Kδ選択的阻害剤としての機能を有する。当該化合物１又はその塩は、特許文献７に記載の方法、及び当業者にとって自明である方法、又はこれらの変法を用いることにより、製造することができる。 [0025] 本明細書において、「PI3Kδ選択的阻害剤」とは、PI3Kδの阻害活性が、PI3Kαの阻害活性と比較してIC 50値において10倍以上、別の態様としては30倍以上、さらに別の態様としては100倍以上の選択性を有する強力な活性を示す阻害剤を意味する。 [0026] 本発明の医薬組成物に含有される化合物１又はその塩の量は、投与経路、剤形、投与部位、賦形剤や添加剤の種類によって異なるが、0.01～100重量%、ある態様としては0.01～50重量%含むことができる。 [0027] 本発明の医薬組成物は、化合物１又はその塩の各種の水和物や溶媒和物、及び結晶多形の物質も含んでいてもよい。溶媒和物としては、例えば、水、アルコール系の溶媒（例えば、エタノール等）との溶媒和物が挙げられる。 [0028] また、本発明の医薬組成物は、製薬学的に許容される、1以上の放射性又は非放射性の同位体でラベルされた化合物１又はその塩を全て包含する。本発明の医薬組成物の有効成分である化合物の同位体ラベルに使用される好適な同位体の例としては、水素（ 2H及び 3H等）、炭素（ 11C、 13C及び 14C等）、窒素（ 13N及び 15N等）、酸素（ 15O, 17O及び 18O等）、フッ素（ 18F等）の同位体が包まれる。 [0029] 同位体でラベルされた本願発明の医薬組成物の有効成分である化合物は、薬物及び／又は基質の組織分布研究等の研究等に使用しうる。例えば、トリチウム（ 3H）、炭素１４（ 14C）等の放射性同位体は、ラベルの容易さ及び検出の簡便さから、本目的で使用しうる。 [0030] より重い同位体への置換、例えば、水素の重水素（ 2H）への置換は、代謝安定性が向上することにより治療上有利（例えば、in vivoでの半減期の増加、必要用量の減少、薬物相互作用の減少）な場合がある。 [0031] 本発明の医薬組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤等による経口投与、又は、静脈内、筋肉内等の注射剤、坐剤、経皮用液剤、軟膏剤、経皮用貼付剤、経粘膜液剤、経粘膜貼付剤、吸入剤等による非経口投与のいずれの態様で投与してもよい。 [0032] 本発明の医薬組成物が、経口投与のための固体組成物の場合は、錠剤、散剤、顆粒剤等が用いられる。このような固体組成物においては、有効成分を、少なくとも１種の不活性な賦形剤と混合される。組成物は、常法に従って、不活性な添加剤、例えば崩壊剤、安定化剤、溶解補助剤を含有していてもよい。錠剤又は丸剤は必要により糖衣又は胃溶性若しくは腸溶性物質のフィルムで被膜してもよい。 [0033] 本発明の医薬組成物が、経口投与のための液体組成物の場合は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤又はエリキシル剤等を含み、一般的に用いられる希釈剤を含んでいてもよい。当該液体組成物は前記の希釈剤以外に可溶化剤、湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。 [0034] 本発明の医薬組成物が注射剤の場合は、無菌の水性若しくは非水性の溶剤、懸濁剤、又は乳濁剤を含有していてもよい。水性の溶剤としては、例えば注射用蒸留水又は生理食塩液が含まれる。非水性の溶剤としては、例えば植物油、アルコール類等がある。このような組成物は、さらに等張化剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤、又は溶解補助剤を含んでもよい。これらは例えばバクテリア保留フィルターを通す濾過、殺菌剤の配合、又は照射によって無菌化される。また、これらは無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水又は無菌の注射用溶媒に溶解又は懸濁して使用することもできる。 [0035] 本発明の医薬組成物が外用剤の場合は、軟膏剤、硬膏剤、クリーム剤、ゼリー剤、パップ剤、噴霧剤、ローション剤等を包含することもできる。一般に用いられる軟膏基剤、ローション基剤、水性又は非水性の液剤、懸濁剤、乳剤等を含有する。 [0036] 本発明の医薬組成物が吸入剤や経鼻剤等の経粘膜剤の場合は、固体、液体又は半固体状のものが用いられ、従来公知の方法に従って製造することができる。例えば公知の賦形剤や、更に、pH調整剤、防腐剤、界面活性剤、滑沢剤、安定剤や増粘剤等が適宜添加されていてもよい。投与は、適宜デバイスを使用することができる。例えば、計量投与吸入デバイス等の公知のデバイスや噴霧器を使用して、化合物を単独で又は処方された混合物の粉末として、もしくは医薬的に許容し得る担体と組み合わせて溶液又は懸濁液として投与することができる。乾燥粉末吸入器等は、単回又は多数回の投与用のものであってもよく、乾燥粉末又は粉末含有カプセルを利用することができる。 [0037] 本発明の医薬組成物は、医薬上許容され得る担体を含んでいてもよい。 [0038] 本発明の医薬組成物を経口投与する場合の１日の投与量は、体重当たり約0.0001～100 mg/kg、好ましくは0.01～30 mg/kg、更に好ましくは0.03～10 mg/kgが適当であり、これを１回で、又は１～４回に分けて投与することができる。本発明の医薬組成物を静脈内投与する場合は、１日の投与量は、体重当たり約0.00001～10 mg/kgが適当で、１日１回～複数回に分けて投与することができる。また、経粘膜剤としては、体重当たり約0.0001～100 mg/kgを１日１回～複数回に分けて投与することができる。投与量は症状、年令、性別等を考慮して個々の場合に応じて適宜決定される。 [0039] 本発明の医薬組成物に含有される有効成分としての化合物は、化合物１又はその塩のほか、公知の組織線維化の予防及び／又は治療に使用するための有効成分としての化合物を同時投与、或いは別個に連続して、若しくは所望の時間間隔をおいて投与してもよい。同時投与製剤は、配合剤であっても別個に製剤化されていてもよい。 [0040] 本明細書において、組織線維化の予防及び／又は治療に使用するための有効成分としての化合物の薬効評価方法としては、組織線維化の予防及び／又は治療のために評価しうる系であればよく、特に限定されないが、例えば国際公開WO2014/069597号に記載の評価系を適用することができる。 [0041] 線維化の分析方法としては、線維化の程度が減少若しくは抑制される、増加若しくは亢進される、又は増減等の変化がない、いずれの状態であるかを測定して評価することをいう。例えば国際公開WO2014/069597号に記載のヒトの強皮症の病態を強く反映する非ヒトモデル動物を用いて目視、組織学的解析、生化学的解析、画像解析等、自体公知の方法で行うことができ、当業者が適宜決定することができる。例えば顔面及び前頭部、後頭部、左右後肢部、尾部における、５段階スコアを評価することができ、具体的には皮膚スコアは、（０：病変無し、１：びらんあり、２：広範囲のびらん、３：潰瘍あり、４：中程度の潰瘍あり、５：広範囲且つ重篤な潰瘍あり）等の評価値を算出することができる。 [0042] 線維化による疾患のうち、例えば強皮症の検査は、上述の線維化を測定する以外にも、強皮症患者の検査を適用することができる。例えば、自己抗体検査、皮膚生検、内臓検査等を行う。強皮症に特異的な自己抗体としては、抗核抗体、特に抗Scl-70抗体（抗トポイソメラーゼI抗体）、抗セントロメア抗体、抗RNAポリメラーゼIII抗体、抗核小体抗体等が挙げられ、ELISA法等により検出することができる。これらに使用する抗体やキットは、上述の市販品等を適宜使用することができる。皮膚生検、内臓検査等は、常法を行う。 [0043] 線維化による疾患について、さらには右心室の拡大、肺高血圧、皮膚病変部へのB及び／又はT細胞の浸潤、脾臓におけるB細胞及び／又はT細胞の活性化など、あるいは、該非ヒト動物由来の生体線維芽細胞における活性型β-カテニンの発現、樹状細胞と共培養した場合の抗原提示能（T細胞の活性化）、p65の発現もしくはNFκB活性の増大等を指標として、強皮症の予防及び／又は治療効果を評価することができる。 実施例 [0044] 以下の実施例において、PI3Kδ選択的阻害剤である化合物１（[(3S)-3-({6-[2-(ジフルオロメチル)-1H-ベンゾイミダゾール-1-イル]-2-(モルホリン-4-イル)ピリミジン-4-イル}アミノ)ピロリジン-1-イル](オキサン-4-イル)メタノン）について、線維症への治療効果を確認した。 [0045] （実施例１）線維症モデルマウスにおける化合物１の強皮症様症状に対する効果 １．線維症モデルマウスの作製 国際公開WO2014/069597号に記載の実施例１に示す線維症モデルマウスを作製した。具体的には、以下の方法で作製した。 公知のIKKβ flox/floxマウスとSm22α-Cre +マウス（Science (2003), vol.300, p.329-332）とを交配し、ヘテロ接合マウスIKKβ flox/wt Sm22α-Cre +/-マウスを得た。前記マウスと、IKKβ flox/floxマウスとを交配させ、IKKβ flox/flox Sm22α-Cre +/-マウス（以下、「KOマウス」）及びIKKβ flox/flox Sm22α-Cre -/-マウス（以下、「WTマウス」）を得た。KOマウスはメンデリアンの法則に従った比率で出生し、その体重推移等の成長はWTマウスと違いが認められなかった。なお、本発明で得られたKOマウスはいずれも純系の動物系統C57BL/6を遺伝子背景とするマウス同士の交配にて得られた。 [0046] ２．経口投与による皮膚スコア評価 化合物１の一塩酸塩を溶媒（0.5%メチルセルロース（Methylcellulose: MC）溶液）で懸濁し、0.003～0.1 mg/mLの化合物１を含む製剤とした。上記１．で作製したKOマウスの16週齢から30週齢の間に、化合物１を含む製剤を10 mL/kgで経口投与することで、0.03～1 mg/kgの化合物１を１日２回投与した。溶媒のみを１日２回、10 mL/kgを経口投与したKOマウスをVehicle群とした。各群それぞれ10例を用いて実験を行った。 [0047] 皮膚スコアは、顔面及び前頭部、後頭部、左右後肢部、尾部における、５段階スコア（０：病変無し、１：びらんあり、２：広範囲のびらん、３：潰瘍あり、４：中程度の潰瘍あり、５：広範囲且つ重篤な潰瘍あり）の合計値で算出した。化合物１を含む製剤の投与終了後のスコアから投与前のスコアを引いた値を算出し、治療効果を評価した。 [0048] なお、本実施例において、びらんとは表皮層までの欠損をいい、潰瘍とは真皮層におよぶ欠損をいう。その結果、化合物１投与群はVehicle群に比して、0.03 mg/kgの低用量から皮膚スコアの上昇が抑制されており、強皮症様の症状が抑制されていた（図１）。 [0049] ３．経口投与による脂肪層の割合評価 全身性強皮症では皮膚の真皮と皮下脂肪組織に膠原線維（コラーゲン）が増加し、皮下脂肪組織が新生膠原線維に置換されるとの所見がある。そこで、上記２．と同様に、化合物１の一塩酸塩を溶媒（0.5% MC溶液）で懸濁し、0.003～0.1 mg/mLの化合物１を含む製剤とし、KOマウスの16週齢から30週齢の間に、１日２回、化合物１を含む製剤を10 mL/kgで経口投与することで、0.03～1 mg/kgの化合物１を投与した。安楽死後、顔面及び頭部皮膚を採取して皮膚病理切片をマッソン‐トリクローム染色を行った。顕微鏡下で染色像をデジタル写真撮影し、表真皮における脂肪層の割合を画像解析ソフト・ImageJを用いて測定した。溶媒を１日２回、10 mL/kgを経口投与したKOマウスをVehicle群とした。各群それぞれ10例を用いて実験を行った。その結果、表真皮における脂肪層の割合はVehicle群に比較して、化合物１投与群の方が0.3 mg/kg投与群及び1 mg/kg投与群で高い割合となっていた（図２、３）。 [0050] これらの結果より、化合物１は強皮症の皮膚潰瘍の抑制作用、脂肪層減少の抑制作用とそれに伴う皮膚組織の正常化作用を示すことが期待された。 [0051] （実施例２）線維症モデルマウスにおける化合物１の肺高血圧症に対する効果 強皮症では肺線維症や肺高血圧症を伴うことがあり、その結果、右心室の拡大及び右心室壁厚の肥大を来す。そこで、化合物１の一塩酸塩を溶媒（0.5% MC溶液）で懸濁し、0.003～0.1 mg/mLの化合物１を含む製剤とし、実施例１の１．で作製した線維症モデルマウス（KOマウス）の16週齢から30週齢の間に、１日２回、化合物１を含む製剤を10 mL/kgで経口投与することで、0.03～1 mg/kgの化合物１を投与した。安楽死後、心臓を摘出した。心臓病理切片を作製してヘマトキシリン・エオジン（HE）染色を行い、右心室の周囲長をImageJソフトウェアを用いて測定し（単位はarbitrary unit）化合物１の効果を確認した。溶媒のみを１日２回、10 mL/kgを経口投与したKOマウスをVehicle群とした。各群それぞれ10例を用いて実験を行った。その結果、右心室周囲長はVehicle群に比較して、化合物１投与群で減少していた（図４）。 これらの結果により、化合物１は肺高血圧症に有効であることが期待された。 [0052] （実施例３）線維症モデルマウスにおける化合物１の線維化に対する効果 化合物１の一塩酸塩を溶媒（0.5% MC溶液）で懸濁し、0.01～0.5 mg/mLの化合物１を含む製剤とした。実施例１の１．で作製した線維症モデルマウス（KOマウス）に、16週齢から30週齢の間、１日２回、化合物１を含む製剤を10 mL/kgで経口投与することで、0.1～5 mg/kgの化合物１を投与し、食道粘膜下層の線維化及び腎臓糸球体硬化を確認した。溶媒のみ投与した群をVehicle群とした。その結果、食道粘膜下層の線維化（図５）、腎臓糸球体硬化（図６）は、Vehicle群と比較して化合物１投与群で線維化が抑制されていた。 これらの結果は、化合物１が皮膚のみならず、食道粘膜下層の線維化や腎臓糸球体硬化も抑制することを示している。 [0053] （実施例４）肺線維症モデルマウス（ブレオマイシン誘導）における化合物１の効果 １．ブレオマイシン誘導肺線維症モデルマウスの作製 C57BL/6Jマウスをペントバルビタールナトリウムで麻酔し、ブレオマイシン生理食塩液（1.2 mg/mL）をMicrosprayer（登録商標）（Penn-Century社）を用いて、50μL/headで経気管的に１回投与した。 [0054] ２．ブレオマイシン誘導肺線維症モデルマウスにおける化合物１の効果 化合物１の一塩酸塩を溶媒（0.5% MC溶液）で懸濁し、0.01～0.5 mg/mLの化合物１を含む製剤とした。本実施例の上記１．で作製したブレオマイシン誘導肺線維症モデルマウスに、ブレオマイシン投与日を含めて２１日間、化合物１を含む製剤を10 mL/kgで経口投与することで、0.1～5 mg/kgの化合物１を１日２回、投与した。対照（陽性コントロール）としてのデキサメタゾン（Dex：0.25 mg/kg）は１日１回、経口投与した。また、ブレオマイシン投与マウスに溶媒のみ10 mL/kgを１日２回、２１日間経口投与した群をVehicle群とした。また、ブレオマイシンを投与していないマウスをControl群とした。Control群14例、Vehicle群14例、化合物１ 0.1 mg/kg投与群13例、0.5 mg/kg投与群14例、1 mg/kg投与群12例、5mg/kg投与群13例、Dex群11例を用いて実験を行った。ブレオマイシン投与後、２２日目にマウスを安楽死させ、肺を摘出してホルマリン固定し、組織切片をマッソントリクローム染色して線維化の程度を示すAshcroftスコア（Ashcroft TA et al., J Clin Pathol, 1988; 41 (4), 467-70）を算出し、肺組織線維化の評価を行なった。Ashcroftスコアは肺組織標本において、顕微鏡下で各視野毎に肺の線維化の程度を軽度から重度に０－８の段階に分けスコア化し、各切片の20視野のスコアの中央値を各個体のスコアとした。その結果、化合物１の5 mg/kg投与群において陽性コントロールのデキサメタゾンと同等の肺線維化抑制作用を示した。化合物１は強皮症に伴う間質性肺炎、特発性肺線維症などの肺の線維化を伴う疾患においても効果が期待できると考えられた（図７）。 [0055] （実施例５）線維症モデルマウスの皮膚線維芽細胞における化合物１の脂肪細胞分化に対する効果 本実施例では、線維症モデルマウスにおける化合物１の皮膚線維芽細胞に対する作用を検討した。 実施例１の１．で作製した線維症モデルマウス（KOマウス）の背部皮膚より調整した、皮膚線維芽細胞（2×10 5個）を、10%ウシ胎児血清（FBS）を含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM, 富士フイルム和光純薬社製）にて5%CO 2雰囲気下、37℃で６ウェルプレートにおいて培養した。５日後、0.5mM isobutyl-methylxanthine（Sigma-Aldrich社製）、1μM Dexamethasone（Sigma-Aldrich社製）、recombinant human insulin （富士フイルム和光純薬社製）（1 μg/ml）、2 μM Rosiglitazone（富士フイルム和光純薬社製）、10% FBS及び10nM 化合物１を含有するDMEMを添加し、5%CO 2雰囲気下、37℃で培養した。２日後、培地をrecombinant human insulin （1μg/ml）、10% FBS及び10 nM化合物１を含有するDMEM培地に交換し、更に２日後、10% FBS及び10 nM化合物１を含有するDMEM培地に交換した。２日後、細胞を回収し、抗PPARγ抗体（Cell Signaling Technology社製）、抗FABP4抗体（Cell Signaling Technology 社製）を用いたウェスタンブロットにより脂肪細胞の分化状態を確認した。なお、β-アクチンはコントロールとして使用した。図８に示すように、線維症モデルマウスにおいて、化合物１により脂肪細胞のマーカーであるPPARγ及びFABP4の発現が増加しており、化合物１は皮膚線維芽細胞に直接作用し、脂肪細胞に分化させることがわかった。 [0056] （実施例６）ヒト皮膚線維芽細胞における化合物１の脂肪細胞分化に対する効果 本実施例では、化合物１の脂肪細胞分化の作用が、ヒト皮膚線維芽細胞でもみられるかどうか確認した。 ヒト正常皮膚から皮膚線維芽細胞（2×10 5個）を調整し、10%ウシ胎児血清（FBS）を含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM, 富士フイルム和光純薬社製）にて5%CO 2雰囲気下、37℃で培養した。７日後、0.5mM isobutyl-methylxanthine （Sigma-Aldrich 社製）、1μM Dexamethasone （Sigma-Aldrich 社製）、recombinant human Insulin （富士フイルム和光純薬社製）（1μg/ml）、2μM Rosiglitazone （富士フイルム和光純薬社製）、10% FBS及び10 nM化合物１を含有するDMEMを添加し、5%CO 2雰囲気下、37℃で培養した。２日後上記と同組成のDMEMに培地を交換した。さらにその２日後に培地をrecombinant human insulin （1μg/ml）、10% FBS及び10 nM化合物１を含有するDMEM培地に交換した。２日後、細胞を回収し、抗Perilipin抗体（Cell Signaling Technology 社製）を用いたウェスタンブロットにより脂肪細胞の分化状態を確認した。なお、GAPDHはコントロールとして使用した。図９に示すように化合物１により脂肪細胞のマーカーであるPerilipinの発現が増加しており、化合物１はヒト皮膚線維芽細胞も脂肪細胞に分化誘導させることがわかった。 [0057] （実施例７）強皮症患者の皮膚線維芽細胞における化合物１の脂肪細胞分化に対する効果 本実施例では、化合物１の脂肪細胞分化の作用が、強皮症患者の皮膚線維芽細胞でもみられるかどうか確認した。 強皮症患者皮膚から皮膚線維芽細胞（2×10 5個）を調整し、10%ウシ胎児血清（FBS）を含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM, 富士フイルム和光純薬社製）にて5%CO 2雰囲気下、37℃で培養した。７日後、0.5mM isobutyl-methylxanthine （Sigma-Aldrich 社製）、1μM Dexamethasone （Sigma-Aldrich 社製）、recombinant human Insulin （富士フイルム和光純薬社製）（1μg/ml）、2μM Rosiglitazone （富士フイルム和光純薬社製）、10% FBS及び10 nM化合物１を含有するDMEMを添加し、5%CO 2雰囲気下、37℃で培養した。２日後上記と同組成のDMEMに培地を交換した。さらにその２日後に培地をrecombinant human insulin （1μg/ml）、10% FBS及び10 nM化合物１を含有するDMEM培地に交換した。２日後、細胞を回収し、抗Perilipin抗体（Cell Signaling Technology 社製）を用いたウェスタンブロットにより脂肪細胞の分化状態を確認した。なお、GAPHDはコントロールとして使用した。図１０に示すように化合物１により脂肪細胞のマーカーであるPerilipinの発現が増加しており、化合物１は強皮症患者の皮膚線維芽細胞も脂肪細胞に分化誘導させることがわかった。 産業上の利用可能性 [0058] 以上詳述したように、本発明の医薬組成物は、線維症モデル動物において、皮膚スコア、脂肪層の割合評価の観点から優れた治療効果を示した。さらに組織学的には、例えば皮膚線維化、下部食道線維化、腎糸球体硬化において優れた改善効果を示した。また、右心室の周囲長についても優れた改善効果を示した。これにより、本発明の医薬組成物は、各種臓器における組織線維化に対して優れた効果を示し、産業上の利用可能性があることが確認された。 |
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