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NERVOUS SYSTEM CELL POPULATION, NERVOUS SYSTEM CELL-CONTAINING PREPARATION AND METHOD FOR PRODUCING SAID POPULATION AND PREPARATION

Foreign code F210010289
File No. (S2019-0467-N0)
Posted date Jan 28, 2021
Country WIPO
International application number 2020JP019290
International publication number WO 2020230856
Date of international filing May 14, 2020
Date of international publication Nov 19, 2020
Priority data
  • P2019-091625 (May 14, 2019) JP
Title NERVOUS SYSTEM CELL POPULATION, NERVOUS SYSTEM CELL-CONTAINING PREPARATION AND METHOD FOR PRODUCING SAID POPULATION AND PREPARATION
Abstract This disclosure pertains to a nervous system cell population, a nervous system cell-containing preparation, and a method for producing said population and preparation. In more detail, this invention pertains to a nervous system cell population derived from intraoral mesenchymal tissue cells having at least 80% of normal diploid cells, a preparation containing the same, and a method for producing said population and preparation.
Outline of related art and contending technology BACKGROUND ART
Central nervous system injuries, especially spinal cord injuries, require nervous system cells to be transplanted within two weeks of the injury (NpL 1). On the other hand, although there are many reports of inducing differentiation from mesenchymal stem cells into neural cells, NpL 2 ~ 4) (, there is no report that cells that have been induced to differentiate into nerves have been isolated from ectodermal mesenchymal tissue in several days.
Furthermore, in order to obtain neural stem cells from tissues harvested from the patient itself, NpL 5 and NpL 1) must be separated using methods such as corona cloning or cell sorter. However, colognal cloning takes time, and a cell sorter requires expensive equipment and antibodies. furthermore, complicated operations such as antibody washing have been unavoidable. In addition, there has been a problem in that damage to neural stem cells is large during the separation process. In particular, in the case of autotransplantation in which the cell-containing preparation or regenerative medical material obtained by processing and manufacturing the cells harvested from the patient itself is transplanted into the same patient, if it takes time to induce differentiation from the cells harvested from the patient into neurons, there is a problem in that autotransplantation cannot respond to treatment in acute and sub-acute phases.
Scope of claims (In Japanese)[請求項1]
 口腔内間葉組織由来の初期培養細胞が神経分化誘導培地中で培養されている細胞接着性細胞培養容器を準備する工程、および
 前記細胞接着性細胞培養容器に接着していない細胞を前記細胞接着性細胞培養容器中から収集して細胞集団を得る工程
を含んでなる、神経系細胞含有製剤の製造方法であって、
 前記神経系細胞含有製剤が、前記細胞集団または当該細胞集団由来のスフェロイドもしくは神経系細胞を含んでなる、方法。

[請求項2]
 前記初期培養開始から神経系細胞含有製剤の取得までの期間が2~10日である、請求項1に記載の方法。

[請求項3]
 前記細胞接着性細胞培養容器に接着していない細胞が、神経分化誘導培地中の遊離細胞であるか、または前記細胞接着性細胞培養容器に接着している細胞に対してさらに接着している細胞である、請求項1または2に記載の方法。

[請求項4]
 前記口腔内間葉組織が、歯肉組織、頬の粘膜下組織、頬脂肪体組織および歯髄組織からなる群から選択される、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。

[請求項5]
 前記口腔内間葉組織がヒト組織である、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。

[請求項6]
 前記初期培養細胞が、初代培養細胞または2~5代継代培養細胞である、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。

[請求項7]
 前記細胞接着性細胞培養容器に接着していない細胞の平均径が12~16μmである、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法。

[請求項8]
 前記初期培養細胞が神経分化誘導培地中で培養される期間が0.5~10日である、請求項1~7のいずれか一項に記載の方法。

[請求項9]
 前記神経分化誘導培地含有容器の細胞接触表面が、軸索が伸張している神経系細胞に対して接着性である、請求項1~8のいずれか一項に記載の方法。

[請求項10]
 前記遊離細胞の収集が、遠心分離、吸引、磁気ビーズ法またはFACS法により行われる、請求項1~9のいずれか一項に記載の方法。

[請求項11]
 前記細胞集団を培養してスフェロイドを形成させる工程をさらに含んでなる、請求項1~10のいずれか一項に記載の方法。

[請求項12]
 前記スフェロイド形成工程における細胞集団の培養期間が0.5~2日である、請求項11に記載の方法。

[請求項13]
 前記スフェロイド形成工程における細胞集団の培養に用いられる培養容器の細胞接触表面が、軸索が伸張している神経系細胞に対して非細胞接着性である、請求項11または12に記載の方法。

[請求項14]
 前記スフェロイド形成工程における細胞集団の培養が、浮遊培養、攪拌培養、旋回培養または振盪培養により行われる、請求項11~13のいずれか一項に記載の方法。

[請求項15]
 前記スフェロイドを分散させ、培養する工程をさらに含んでなる、請求項11~14のいずれか一項に記載の方法。

[請求項16]
 前記スフェロイドを分散して得られる細胞の培養期間が3時間~7日である、請求項15に記載の方法。

[請求項17]
 前記神経系細胞含有製剤が神経幹細胞を含んでなる、請求項1~16のいずれか一項に記載の方法。

[請求項18]
 前記神経系細胞含有製剤が再生医療用製剤である、請求項1~17のいずれか一項に記載の方法。

[請求項19]
 前記神経系細胞含有製剤が自家移植用または他家移植用の製剤である、請求項1~18のいずれか一項に記載の方法。

[請求項20]
 前記神経系細胞含有製剤が、神経組織の損傷を修復するために用いられる、請求項1~19のいずれか一項に記載の方法。

[請求項21]
 請求項1~20のいずれか一項に記載の方法により得られる、神経系細胞含有製剤。

[請求項22]
 正常二倍体細胞の割合が80%以上である、口腔内間葉組織細胞由来の神経系細胞集団。

[請求項23]
 前記正常二倍体細胞の割合が90%以上である、請求項22に記載の神経系細胞集団。

[請求項24]
 前記口腔内間葉組織細胞が、初代培養細胞または2~5代継代培養細胞である、請求項22または23に記載の神経系細胞集団。

[請求項25]
 前記口腔内間葉組織が、歯肉組織、頬の粘膜下組織、頬脂肪体組織および歯髄組織からなる群から選択される、請求項22~24のいずれか一項に記載の神経系細胞集団。

[請求項26]
 前記口腔内間葉組織がヒト組織である、請求項22~25のいずれか一項に記載の神経系細胞集団。

[請求項27]
 請求項15に記載の方法により得られる、請求項22~26のいずれか一項に記載の神経系細胞集団。

[請求項28]
 請求項22~27のいずれか一項に記載の神経系細胞集団を含有する、医薬製剤。

[請求項29]
 再生医療用製剤である、請求項28に記載の医薬製剤。

[請求項30]
 自家移植用または他家移植用の製剤である、請求項28または29に記載の医薬製剤。

[請求項31]
 神経組織の損傷を修復するために用いられる、請求項30に記載の医薬製剤。
  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • UNIVERSITY OF TSUKUBA
  • Inventor
  • MARUSHIMA Aiki
  • MATSUMURA Akira
  • BUKAWA Hiroki
  • KODA Masao
  • ISHIKAWA Hiroshi
  • OHYAMA Akihiro
  • TOYOMURA Junko
  • MATSUMARU Yuji
  • MATSUMURA Hideaki
  • WATANABE Miho
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DJ DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IR IS JO JP KE KG KH KN KP KR KW KZ LA LC LK LR LS LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SA SC SD SE SG SK SL ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN WS ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW KM ML MR NE SN ST TD TG
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