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FLOCCULENT YEAST AND METHOD FOR PRODUCTION THEREOF

Foreign code F110002706
File No. S2008-0427-C0
Posted date Apr 8, 2011
Country WIPO
International application number 2009JP001214
International publication number WO 2009/116286
Date of international filing Mar 18, 2009
Date of international publication Sep 24, 2009
Priority data
  • P2008-069329 (Mar 18, 2008) JP
  • P2008-187206 (Jul 18, 2008) JP
Title FLOCCULENT YEAST AND METHOD FOR PRODUCTION THEREOF
Abstract Disclosed is a novel transformant of Kluyveromyces marxianus, which is produced by introducing a foreign flocculation gene into a bacterium Kluyveromyces marxianus, and has suitable levels of heat resistance and flocculating properties for the industrial production of bioethanol. Also disclosed is a method for producing the transformant with efficiency. Attention has focused on a Saccharomyces cerevisiae flocculation gene FLO as a foreign gene for imparting flocculating properties to a bacterium Kluyveromyces marxianus, and a linear DNA fragment containing a known expression promoter sequence and a FLO gene sequence originated from Saccharomyces cerevisiae is produced. The linear DNA fragment is introduced into a bacterium Kluyveromyces marxianus, and it is confirmed that a transformant of Kluyveromyces marxianus can be produced efficiently and that the flocculating properties of the transformant is significantly improved unexpectedly.
Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】以下の工程(A)~(C)を順次含むことを特徴とする凝集性及び耐熱性を有するクルイベロマイセス・マルシアヌス(Kluyveromyces marxianus)形質転換体の作製方法。
(A)サッカロマイセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)の内在性FLO遺伝子の上流にマーカー遺伝子配列及び発現プロモーター配列を導入してサッカロマイセス・セレビシエ形質転換体を作製する工程;
(B)工程(A)で作製されたサッカロマイセス・セレビシエ形質転換体由来の染色体DNAから、マーカー遺伝子配列、発現プロモーター配列、及び、FLO遺伝子配列を含むDNA断片を得る工程;
(C)工程(B)で得られたDNA断片を、FLO遺伝子発現カセットとしてクルイベロマイセス・マルシアヌスに導入し、クルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体を作製する工程;

【請求項2】サッカロマイセス・セレビシエの内在性FLO遺伝子が、FLO1遺伝子、FLO5遺伝子、FLO9遺伝子、及び、FLO10遺伝子から選択される1以上のFLO遺伝子であることを特徴とする請求項1記載のクルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体の作製方法。

【請求項3】マーカー遺伝子が、栄養要求性マーカー遺伝子であることを特徴とする請求項1又は2記載のクルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体の作製方法。

【請求項4】栄養要求性マーカー遺伝子がヒスチジン、ロイシン、ウラシル、メチオニン、リシン、アデニン、トリプトファン、アルギニンの少なくとも1つの栄養要求性遺伝子であることを特徴とする請求項1~3のいずれかに記載のクルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体の作製方法。

【請求項5】栄養要求性マーカー遺伝子がURA3遺伝子であることを特徴とする請求項4記載のクルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体の作製方法。

【請求項6】クルイベロマイセス・マルシアヌスが、ヒスチジン、ロイシン、ウラシル、メチオニン、リシン、アデニン、トリプトファン、アルギニンの少なくとも1つの栄養要求性遺伝子に変異を有するクルイベロマイセス・マルシアヌス変異体であることを特徴とする請求項1~5のいずれかに記載のクルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体の作製方法。

【請求項7】発現プロモーターがグリセルアルデヒド-3-リン酸
デヒドロゲナーゼ3(TDH3)プロモーターであることを特徴とする請求項1~6のいずれかに記載のクルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体の作製方法。

【請求項8】線状のDNA断片を、FLO遺伝子発現カセットとしてクルイベロマイセス・マルシアヌスに導入することを特徴とする請求項1~7のいずれかに記載のクルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体の作製方法。

【請求項9】クルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体が、RAK4299株(NITE BP-514)、RAK4300株(NITE BP-515)、RAK4301株(NITE BP-516)、又は、RAK4302株(NITE BP-517)であることを特徴とする請求項1~8のいずれか記載のクルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体の作製方法。

【請求項10】 請求項1~8のいずれかに記載の作製方法により作製された凝集性及び耐熱性を有するクルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体。

【請求項11】RAK4299株(NITE BP-514)、RAK4300株(NITE BP-515)、RAK4301株(NITE BP-516)、又は、RAK4302株(NITE BP-517)であることを特徴とする請求項10記載のクルイベロマイセス・マルシアヌス形質転換体。
  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • YAMAGUCHI UNIVERSITY
  • Inventor
  • AKADA, Rinji
  • SANOM, Nonklang
  • HOSHIDA, Hisashi
  • ARMED ABDEL-BANAT, Babiker Mohamed
IPC(International Patent Classification)
Specified countries AE(UTILITY MODEL),AG,AL(UTILITY MODEL),AM(PROVISIONAL PATENT)(UTILITY MODEL),AO(UTILITY MODEL),AT(UTILITY MODEL),AU,AZ(UTILITY MODEL),BA,BB,BG(UTILITY MODEL),BH(UTILITY MODEL),BR(UTILITY MODEL),BW(UTILITY MODEL),BY(UTILITY MODEL),BZ(UTILITY MODEL),CA,CH,CN(UTILITY MODEL),CO(UTILITY MODEL),CR(UTILITY MODEL),CU(INVENTOR'S CERTIFICATE),CZ(UTILITY MODEL),DE(UTILITY MODEL),DK(UTILITY MODEL),DM(UTILITY MODEL),DO(UTILITY MODEL),DZ,EC(UTILITY MODEL),EE(UTILITY MODEL),EG(UTILITY MODEL),ES(UTILITY MODEL),FI(UTILITY MODEL),GB,GD,GE(UTILITY MODEL),GH(UTILITY CERTIFICATE),GM,GT(UTILITY MODEL),HN,HR(CONSENSUAL PATENT),HU(UTILITY MODEL),ID,IL,IN,IS,JP(UTILITY MODEL),KE(UTILITY MODEL),KG(UTILITY MODEL),KM,KN,KP(INVENTOR'S CERTIFICATE)(UTILITY MODEL),KR(UTILITY MODEL),KZ(PROVISIONAL PATENT)(UTILITY MODEL),LA,LC,LK,LR,LS(UTILITY MODEL),LT,LU,LY,MA,MD(UTILITY MODEL),ME,MG,MK,MN,MW,MX(UTILITY MODEL),MY(UTILITY-INNOVATION),MZ(UTILITY MODEL),NA,NG,NI(UTILITY MODEL),NO,NZ,OM(UTILITY MODEL),PG,PH(UTILITY MODEL),PL(UTILITY MODEL),PT(UTILITY MODEL),RO,RS(PETTY PATENT),RU(UTILITY MODEL),SC,SD,SE,SG,SK(UTILITY MODEL),SL(UTILITY MODEL),SM,ST,SV(UTILITY MODEL),SY,TJ(UTILITY MODEL),TM(PROVISIONAL PATENT),TN,TR(UTILITY MODEL),TT(UTILITY CERTIFICATE),TZ,UA(UTILITY MODEL),UG(UTILITY CERTIFICATE),US,UZ(UTILITY MODEL),VC(UTILITY CERTIFICATE),VN(PATENT FOR UTILITY SOLUTION),ZA,ZM,ZW,EP(AT,BE,BG,CH,CY,CZ,DE,DK,EE,ES,FI,FR,GB,GR,HR,HU,IE,IS,IT,LT,LU,LV,MC,MK,MT,NL,NO,PL,PT,RO,SE,SI,SK,TR),OA(BF(UTILITY MODEL),BJ(UTILITY MODEL),CF(UTILITY MODEL),CG(UTILITY MODEL),CI(UTILITY MODEL),CM(UTILITY MODEL),GA(UTILITY MODEL),GN(UTILITY MODEL),GQ(UTILITY MODEL),GW(UTILITY MODEL),ML(UTILITY MODEL),MR(UTILITY MODEL),NE(UTILITY MODEL),SN(UTILITY MODEL),TD(UTILITY MODEL),TG(UTILITY MODEL)),AP(BW(UTILITY MODEL),GH(UTILITY MODEL),GM(UTILITY MODEL),KE(UTILITY MODEL),LS(UTILITY MODEL),MW(UTILITY MODEL),MZ(UTILITY MODEL),NA(UTILITY MODEL),SD(UTILITY MODEL),SL(UTILITY MODEL),SZ(UTILITY MODEL),TZ(UTILITY MODEL),UG(UTILITY MODEL),ZM(UTILITY MODEL),ZW(UTILITY MODEL)),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,MD,RU,TJ,TM)
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