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IGA-BINDING PEPTIDE AND IGA PURIFICATION USING SAME

Foreign code F120006808
File No. S2010-0824-C0
Posted date Jul 3, 2012
Country WIPO
International application number 2011JP061906
International publication number WO 2011148952
Date of international filing May 24, 2011
Date of international publication Dec 1, 2011
Priority data
  • P2010-118508 (May 24, 2010) JP
Title IGA-BINDING PEPTIDE AND IGA PURIFICATION USING SAME
Abstract Disclosed is a peptide which is characterized by comprising an amino acid sequence that is represented by (X1-3)-C-(X8-10)-C-(X1-3) (wherein each X independently represents an arbitrary amino acid residue other than cysteine and C represents a cysteine residue) and consists of 12-18 amino acid residues. The peptide is also characterized by being capable of binding to human IgA. Also disclosed is a method for assaying or purifying human IgA using the peptide.
Outline of related art and contending technology BACKGROUND ART
(IgA) immunoglobulin A is, essential in the mucosal immunity as well as antibody, immunoglobulin g (IgG) present in the blood subsequent to predominant antibody class and 2, which operates on a bacteria and virus defense against infection. Is IgA, IgA dimer structure (sIgA) secreted IgA (mIgA) and monomer structure is present. Is sIgA, through Joining chain(J-chain) SS bond has a dimeric structure, is secreted into the mucus, many of the mIgA, exists in blood. In addition, is IgA, 2 of the hinge region of different lengths can be the main types of sub-type, there are IgA2 and IgA1, IgA2 Pro-rich region in the absence of 13 residues. The function of the directed to a pharmaceutical IgA, from their importance in the immune infection, in the development of mucosal vaccine have been focused (non-patent document 1 and 2), IgA is in the blood, particularly neutrophils ADCC is support by the cancer cells have been reported (non-patent document 3 and 4) from, for the treatment of cancer and autoimmune diseases that its clinical application is expanded in the same manner as in the format of a IgG antibody pharmaceuticals, also IgA antibody pharmaceuticals that target the cancer (non-patent document 5) as expected.
However, the factors for inhibiting the development of a medicament to IgA as one, such as IgG affinity columns A/g protein in the manufacture of industrial, pharmaceutical scale can be supported in a purification method and has not been established. Conventional, as are several methods of IgA purification methods have been reported (non-patent document 6). For example, IgA1 recognizes a sugar chain specific lectin (non-patent document 7) or a mimetic thereof Protein A Jackalin synthetic ligands (non-patent document 8) in TG19318 by the reported methods of purification IgA is, they are a problem in a binding capacity and specificity is a limitation in use. In addition, derived from a bacterium Streptococcus (non-patent document 9) surface protein from a member of the M protein family, was found IgA binding protein (non-patent document 10, patent document 1 and 11), such as IgG interaction with protein in the serum of other (non-patent document 12) or the like becomes a problem and, used as an affinity ligand specific IgA is there is a failure. On the other hand, Sandin et al., 48 residues in this Streptococcal Sir22 (M22) protein extracts QCRPSKGRKRGFCW (Streptococcal IgA-binding peptide, Sap), via Cys SS bond by dimerization, affinity than the original Sir22 protein (Kd value 3-4 nm) is somewhat inferior to the of the, a relatively high affinity (Kd value 20 nm) reported affinity ligands for purification of IgA (non-patent document 13, patent document 2). The ligand is in practice, of the bound Fc IgA, sIgA, both purification mIgA, antigen-specific IgA1 and further, application to the detection of a monoclonal antibody IgA2 was also possible.
IgA binding protein in the same manner as described above, by the present inventors also IgG IgG binding peptides have been developed (patent document 3).
Scope of claims (In Japanese)請求の範囲 [請求項1]
 下記の式I:
(X 1-3)-C-(X 8-10)-C-(X 1-3)  (I)
(式中、Xの各々は独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であり、Cはシステイン残基である。)
によって表される、12~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とするペプチド。

[請求項2]
 下記の式II:
(X 3)-C-L-(X 7-9)-C-(X 3)  (II)
(式中、Xの各々は独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であり、Cはシステイン残基であり、Lはロイシン残基であり、但し、18アミノ酸残基とした場合の、N末端から9番目及び10番目のアミノ酸残基Xは独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいはそのいずれか一方又は両方が欠失している。)
によって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする、請求項1に記載のペプチド。

[請求項3]
 下記の式III:
(X 3)-C-L-X-Y-(X 1-3)-G-(X 2)-V-C-(X 3)  (III)
(式中、Xの各々は独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であり、Cはシステイン残基であり、Lはロイシン残基であり、Yはチロシン残基であり、Gはグリシン残基であり、Vはバリン残基であり、但し、18アミノ酸残基とした場合の、N末端から9番目及び10番目のアミノ酸残基Xは独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいはそのいずれか一方又は両方が欠失している。)
によって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする、請求項2に記載のペプチド。

[請求項4]
 下記の式IV:
(X 3)-C-L-X-Y-(X 1-3)-G-(X 2)-V-C-(X 3)  (IV)
(式中、Xの各々は独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であり、Cはシステイン残基であり、Lはロイシン残基であり、Yはチロシン残基であり、Gはグリシン残基であり、Vはバリン残基であり、但し、18アミノ酸残基とした場合の、N末端から9番目及び10番目のアミノ酸残基Xは独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいはそのいずれか一方又は両方が欠失している、並びに、N末端から16番目及び18番目のアミノ酸残基は独立的に疎水性アミノ酸残基である。)
によって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする、請求項3に記載のペプチド。

[請求項5]
 18アミノ酸残基とした場合の、N末端から1~3、5~14、16~18番目の各アミノ酸残基が、
1番目のアミノ酸残基= Q, H, K, R, S又はP、
2番目のアミノ酸残基= M, K, R, L, V, A又はD、
3番目のアミノ酸残基= R, L, M又はV、
5番目のアミノ酸残基= L、
6番目のアミノ酸残基= S, H, Q, T, K, R, N又はA、
7番目のアミノ酸残基= Y、
8番目のアミノ酸残基= K又はR、
9番目のアミノ酸残基= C以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいは欠失している、
10番目のアミノ酸残基= C以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいは欠失している、
11番目のアミノ酸残基= G、
12番目のアミノ酸残基= R, S, T又はK、
13番目のアミノ酸残基= R, M, K, E, N又はP、
14番目のアミノ酸残基= V、
16番目のアミノ酸残基= L, F, V又はI、
17番目のアミノ酸残基= W, L, R, E, T, S, Q, P又はA、あるいは、
18番目のアミノ酸残基= L, I, Y, A又はV
である、請求項1~4のいずれか1項に記載のペプチド。

[請求項6]
 上記の式I~式IVのペプチドにおいて、18アミノ酸残基とした場合のN末端から16番目のアミノ酸残基Xがロイシン又はフェニルアラニン残基である、請求項1~5のいずれか1項に記載のペプチド。

[請求項7]
 上記の式I~式IVのペプチドにおいて、18アミノ酸残基とした場合のN末端から18番目のアミノ酸残基Xがロイシン残基である、請求項1~6のいずれか1項に記載のペプチド。

[請求項8]
 以下の1)~26)のいずれかのアミノ酸配列からなる、請求項1~7のいずれか1項に記載のペプチド。
1) HMRCLHYKGRRVCFLL(配列番号1)
2) QMRCLSYKGRRVCLWL(配列番号2)
3) HKRCLHYRGRMVCFLI(配列番号3)
4) KRLCLQYKGSKVCFRL(配列番号4)
5) RMRCLTYRGRRVCLEL(配列番号5)
6) SMRCLQYRGSRVCLTL(配列番号6)
7) QKRCLKYKGSRVCFFL(配列番号7)
8) HLRCLRYKGTRVCFSL(配列番号8)
9) HVRCLSYKGREVCVQL(配列番号9)
10) PRMCLHYKGRRVCIPY(配列番号10)
11) HVRCLRYRGKNVCFLL(配列番号11)
12) SDVCLRYRGRPVCFQV(配列番号15)
13) RDVCLRYRGRPVCFQV(配列番号16)
14) HDVCLRYRGRPVCFQV(配列番号17)
15) SMVCLRYRGRPVCFQV(配列番号19)
16) SAVCLRYRGRPVCFQV(配列番号20)
17) SDVCLNYRGRPVCFQV(配列番号24)
18) SDVCLHYRGRPVCFQV(配列番号25)
19) SDVCLAYRGRPVCFQV(配列番号26)
20) SDVCLRYRGRPVCFRV(配列番号37)
21) SDVCLRYRGRPVCFLV(配列番号38)
22) SDVCLRYRGRPVCFAV(配列番号39)
23) SDVCLRYRGRPVCFQL(配列番号41)
24) SDVCLRYRGRPVCFQA(配列番号42)
25) HMVCLAYRGRPVCFAL(配列番号43)
26) HMVCLSYRGRPVCFSL(配列番号44)

[請求項9]
 ペプチドが2つのシステイン(C)残基間でジスルフィド結合を形成している、請求項1~8のいずれか1項に記載のペプチド。

[請求項10]
 IgAの血清型(単量体)及び分泌型(二量体)に結合する、請求項1~9のいずれか1項に記載のペプチド。

[請求項11]
 標識が結合されている、請求項1~10のいずれか1項に記載のペプチド。

[請求項12]
 請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチドと連結されたタンパク質からなる融合タンパク質。

[請求項13]
 請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチドを固相に結合してなる固定化ペプチド。

[請求項14]
 請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチドをコードする核酸。

[請求項15]
 請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチド又は請求項13に記載の固定化ペプチドをIgAと結合させること、並びに、結合したIgAを遊離させてIgAを回収することを含む、IgAの精製方法。

[請求項16]
 請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチド又は請求項13に記載の固定化ペプチドにサンプル中のIgAを結合させ、結合したIgAを検出することを含む、IgAの検出方法。

[請求項17]
 請求項1~11のいずれか1項に記載のペプチド又は請求項13に記載の固定化ペプチドの少なくとも1種を含む、ヒトIgAの分析又は精製のためのキット。

[請求項18]
 請求項13に記載の固定化ペプチドを含有する、IgA分離用カラム。

  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • KAGOSHIMA UNIVERSITY
  • OTSUKA CHEMICAL CO., LTD.
  • Inventor
  • ITO Yuji
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KN KP KR KZ LA LC LK LR LS LT LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PE PG PH PL PT RO RS RU SC SD SE SG SK SL SM ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ MD RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG
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