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IgA-BINDING PEPTIDE AND PURIFICATION OF IgA THEREBY

Foreign code F130007426
File No. S2012-0160-N0
Posted date Jun 24, 2013
Country WIPO
International application number 2012JP080875
International publication number WO 2013081037
Date of international filing Nov 29, 2012
Date of international publication Jun 6, 2013
Priority data
  • P2011-262871 (Nov 30, 2011) JP
Title IgA-BINDING PEPTIDE AND PURIFICATION OF IgA THEREBY
Abstract The present invention relates to a peptide which contains an amino acid sequence consisting of 14 to 18 amino acid residues and capable of binding to human IgA, and an analysis or purification method for the human IgA which uses the peptide. The peptide is represented by H-(X1)-V-C-L-S-Y-R-(X2)-(X3)-G-(X4)-P-(X5)-C-(X6)-(X7)-(X8) (I) (sequence number 1) (in the formula, each of the Xs is independently selected from the following: X1 is a Gln residue or a Met residue; X2 and X3 are independently any amino acid residue other than Cys or any one or both sides thereof are deleted; X4 is an Arg residue or the Gln residue; X5 is a Val residue or a Thr residue; X6 is a Phe residue or a Tyr residue; X7 is a Ser residue or null; X8 is a Leu residue, Thr residue, or null [in the case where X1 is the Met residue, X7 is the Ser residue or null, and X8 is null]).
Outline of related art and contending technology BACKGROUND ART
(IgA) immunoglobulin A is, essential in the mucosal immunity as well as antibody, immunoglobulin g (IgG) present in the blood subsequent to predominant antibody class and 2, which operates on a bacteria and virus defense against infection. Is IgA, IgA dimer structure (sIgA) secreted IgA (mIgA) and monomer structure is present. Is sIgA, through Joining chain(J-chain) SS bond has a dimeric structure, is secreted into the mucus, many of the mIgA, exists in blood. In addition, is IgA, 2 of the hinge region of different lengths can be the main types of sub-type, there are IgA2 and IgA1, IgA2 Pro-rich region 13 in the absence of residues. The function of the directed to a pharmaceutical IgA, from their importance in the immune infection, in the development of mucosal vaccine have been focused (non-patent document 1 and 2), IgA is in the blood, particularly neutrophils ADCC is support by the cancer cells have been reported (non-patent document 3 and 4) from, for the treatment of cancer and autoimmune diseases that its clinical application is expanded in the same manner as in the format of a IgG antibody pharmaceuticals, also IgA antibody pharmaceuticals that target the cancer as expected (non-patent document 5).
However, the factors for inhibiting the development of a medicament to IgA as one, such as IgG affinity columns A/g protein in the manufacture of industrial, pharmaceutical scale can be supported in a purification method and has not been established. Conventional, as are several methods of IgA purification methods have been reported (non-patent document 6). For example, IgA1 recognizes specific sugar chains (non-patent document 7) and lectin Jacalin Protein A mimetic synthetic ligands (non-patent document 8) in TG19318 by the reported methods of purification IgA is, they are a problem in a binding capacity and specificity is a limitation in use. In addition, derived from a bacterium Streptococcus (non-patent document 9) surface protein from a member of the M protein family, was found IgA binding protein (non-patent document 10, patent document 1 and 11), such as IgG interaction with protein in the serum of other (non-patent document 12) or the like becomes a problem and, used as an affinity ligand specific IgA is there is a failure. On the other hand, Sandin et al., 48 residues in this Streptococcal Sir22 (M22) protein extracts QCRPSKGRKRGFCW (Streptococcal IgA-binding peptide, Sap), via Cys SS bond by dimerization, affinity than the original Sir22 protein (Kd value 3-4 nm) is somewhat inferior to the of the, a relatively high affinity (Kd value 20 nm) affinity ligands for purification of IgA (non-patent document 13) reported. The ligand is in practice, of the bound Fc IgA, sIgA, both purification mIgA, antigen-specific IgA1 and further, application to the detection of a monoclonal antibody IgA2 was also possible.
IgA binding protein in the same manner as described above, by the present inventors also IgG IgG binding peptides have been developed (patent document 2). However, IgG-binding peptide, peptides that bind to specific IgG because, as IgA-binding peptides cannot be a wobble, the difference in its specificity, of the peptide specific IgA development, the development of peptides binding IgG is completely different approach is required.
Therefore, in the art IgA purification or analysis (for the detection or quantitation) of a new technique for still has been desired earnestly.
Scope of claims (In Japanese)請求の範囲 [請求項1]
 下記の式I:
H-(X 1)-V-C-L-S-Y-R-(X 2)-(X 3)-G-(X 4)-P-(X 5)-C-(X 6)-(X 7)-(X 8)  (I) (配列番号1)
(式中、
Hはヒスチジン残基であり、
Vはバリン残基であり、
Cはシステイン残基であり、
Lはロイシン残基であり、
Sはセリン残基であり、
Yはチロシン残基であり、
Rはアルギニン残基であり、
Gはグリシン残基であり、
Pはプロリン残基であり、
Xの各々は独立的に、以下より選択される:
X 1は、グルタミン残基又はメチオニン残基であり、
X 2及びX 3は、独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいはそのいずれか一方又は両方が欠失しており、
X 4は、アルギニン残基又はグルタミン残基であり、
X 5は、バリン残基又はトレオニン残基であり、
X 6は、フェニルアラニン残基又はチロシン残基であり、
X 7は、セリン残基又はnullであり、
X 8は、ロイシン残基、トレオニン残基又はnullである
[但し、X 1がメチオニン残基である場合、X 7は、セリン残基又はnullであり、X 8は、nullとする])
によって表される、14~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とするペプチド。

[請求項2]
 下記の式II:
H-Q-V-C-L-S-Y-R-(X 2)-(X 3)-G-(X 4)-P-(X 5)-C-(X 6)-S-(X 8)  (II)  (配列番号2)
(式中、
Hはヒスチジン残基であり、
Qはグルタミン残基であり、
Vはバリン残基であり、
Cはシステイン残基であり、
Lはロイシン残基であり、
Sはセリン残基であり、
Yはチロシン残基であり、
Rはアルギニン残基であり、
Gはグリシン残基であり、
Pはプロリン残基であり、
Fはフェニルアラニン残基であり、
Xの各々は独立的に、以下より選択される:
X 2及びX 3は、独立的にシステイン以外の任意のアミノ酸残基であるか、あるいはそのいずれか一方又は両方が欠失しており、
X 4は、アルギニン残基又はグルタミン残基であり、
X 5は、バリン残基又はトレオニン残基であり、
X 6は、フェニルアラニン残基又はチロシン残基であり、
X 8は、ロイシン残基、又はトレオニン残基である)
によって表される、16~18アミノ酸残基からなるアミノ酸配列を含み、かつヒトIgAと結合可能であることを特徴とする、請求項1に記載のペプチド。

[請求項3]
 以下のいずれかのアミノ酸配列からなる、請求項1に記載のペプチド。
HMVCLSYRGRPVCF (配列番号3)
HMVCLSYRGRPVCFS (配列番号4)

[請求項4]
 以下1)~8)のいずれかのアミノ酸配列からなる、請求項1又は2に記載のペプチド。
1) HQVCLSYRGRPVCFSL (配列番号5)
2) HQVCLSYRGQPVCFSL (配列番号6)
3) HQVCLSYRGRPTCFSL (配列番号7)
4) HQVCLSYRGRPVCYSL (配列番号8)
5) HQVCLSYRGRPVCFST (配列番号9)
6) HQVCLSYRGQPVCFST (配列番号10)
7) HQVCLSYRGRPTCFST (配列番号11)
8) HQVCLSYRGQPTCFST (配列番号12)

[請求項5]
 ペプチドが2つのシステイン(C)残基間でジスルフィド結合を形成している、請求項1~4のいずれか1項に記載のペプチド。

[請求項6]
 IgAの血清型(単量体)及び分泌型(二量体)に結合する、請求項1~5のいずれか1項に記載のペプチド。

[請求項7]
 標識が結合されている、請求項1~6のいずれか1項に記載のペプチド。

[請求項8]
 請求項1~7のいずれか1項に記載のペプチドと連結されたタンパク質からなる融合タンパク質。

[請求項9]
 請求項1~7のいずれか1項に記載のペプチドを固相に結合してなる固定化ペプチド。

[請求項10]
 請求項1~7のいずれか1項に記載のペプチドをコードする核酸。

[請求項11]
 請求項1~7のいずれか1項に記載のペプチド又は請求項9に記載の固定化ペプチドをIgAと結合させること、並びに、結合したIgAを遊離させてIgAを回収することを含む、IgAの精製方法。

[請求項12]
 請求項1~7のいずれか1項に記載のペプチド又は請求項9に記載の固定化ペプチドにサンプル中のIgAを結合させ、結合したIgAを検出することを含む、IgAの検出方法。

[請求項13]
 請求項1~7のいずれか1項に記載のペプチド又は請求項9に記載の固定化ペプチドの少なくとも1種を含む、ヒトIgAの分析又は精製のためのキット。

[請求項14]
 請求項9に記載の固定化ペプチドを含有する、IgA分離用カラム。

  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • KAGOSHIMA UNIVERSITY
  • OTSUKA CHEMICAL CO., LTD.
  • Inventor
  • ITO Yuji
  • ITO Osamu
  • OOZONO Shinji
  • ISHITOBI Hiroyuki
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KN KP KR KZ LA LC LK LR LS LT LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SC SD SE SG SK SL SM ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG
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