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GLUCOSYL-α-1,2-GLYCEROL PHOSPHORYLASE AND METHOD FOR PRODUCING GLUCOSYL-α-1,2-GLYCEROL USING SAME meetings

Foreign code F140008023
File No. S2013-0286-C0
Posted date Nov 18, 2014
Country WIPO
International application number 2013JP082768
International publication number WO 2014103659
Date of international filing Dec 6, 2013
Date of international publication Jul 3, 2014
Priority data
  • P2012-286731 (Dec 28, 2012) JP
Title GLUCOSYL-α-1,2-GLYCEROL PHOSPHORYLASE AND METHOD FOR PRODUCING GLUCOSYL-α-1,2-GLYCEROL USING SAME meetings
Abstract Provided are a novel glucosyl-α-1,2-glycerol phosphorylase that makes it possible to mass-produce glucosyl-α-1,2-glycerol easily and selectively from inexpensive materials, and a method for producing glucosyl-α-1,2-glycerol using the same. According to the present invention, glucosyl-α-1,2-glycerol is mass-produced easily and selectively by (1) conducting an enzymatic reaction in a solution containing β-glucose 1-phosphate, glycerol, and glucosyl-α-1,2-glycerol phosphorylase or (2) conducting an enzymatic reaction in a solution containing a carbohydrate phosphorolytic enzyme that produces β-glucose 1-phosphate, and a sugar that serves as a substrate thereof, and glycerol, phosphoric acid, and glucosyl-α-1,2-glycerol phosphorylase.
Outline of related art and contending technology BACKGROUND ART
Traditional Brewing Society of Japan and the fermented soybean paste, sweet sake have shown that the glucosyl - α - 1, glycerol is 2 -, the action to suppress cancer cell growth, anti-allergic action upon, vascular endothelial cell growth promoting factor production promoting action, blood glucose increase inhibitory effect, antibacterial effect, cell energizing action, dermal matrix production promoting action, inhibitory effect on neutral fat accumulation, melanin production suppressing, have been reported and the reduction effect of skin irritation, food, cosmetic, pharmaceuticals are expected to be used as a raw material (Patent Document 1 and 2). In this way as well as from the surface of the nutrient in recent years, the functionality of the oligosaccharides are of interest, the difficulty of preparing high purity, the high production cost hamper the industrial application of the study. Therefore, functional oligosaccharides of up to and including a variety of useful selective low-cost mass preparation method the currently established has been strongly requested.
However, conventional glucosyl - α - 1, glycerol production processes include 2 -, and the following drawbacks, could not be produced at a low cost. Chemical oxidation method is, using the periodate oxidation reaction, can be synthesized from the maltitol is, the position selectivity of the reaction is not sufficient, the yield was low (18%: weight ratio). In addition, the enzymatic synthesis method, sucrose phosphorylase and α - glucosidase can be synthesized by the reaction of the glycoproteins, reaction itself is not the original reaction of these enzymes, excess glycerol must be carried out in the presence, further α - glucosidase is used as the byproducts from the reaction site for selective, and had a low yield (5 .9%: glycerol mole ratio on the basis). In addition, a problem that disassembly of the synthesis products and the like.
Scope of claims (In Japanese)請求の範囲 [請求項1]
 β-グルコース1-リン酸と、グリセロールとに作用して、グルコシル-α-1,2-グリセロールを生成することを特徴とするグルコシル-α-1,2-グリセロールホスホリラーゼ。

[請求項2]
 以下の酵素学的性質を有する請求項1記載のグルコシル-α-1,2-グリセロールホスホリラーゼ:
 a)作用
 β-グルコース1-リン酸とグリセロールとに作用してグルコシル-α-1,2-グリセロールを生成する;
 b)基質特異性
 β-グルコース1-リン酸とグリセロールとに作用する;
 c)至適pH
30℃の条件下で、pH7.5;
 d)温度安定性
pH7.5の条件下で、40℃まで安定;
 e)pH安定性
4℃、24時間の条件下で、pH5.5-9.5で安定。

[請求項3]
 配列番号1記載のアミノ酸配列、又は配列番号1記載のアミノ酸配列において、1つ若しくは数個のアミノ酸残基が、欠失、置換、付加、又は挿入された配列を有する請求項1又は2に記載のグルコシル-α-1,2-グリセロールホスホリラーゼ。

[請求項4]
 バチルス・セレニティレデュセンス由来の請求項1~3のいずれか1項に記載のグルコシル-α-1,2-グリセロールホスホリラーゼ。

[請求項5]
 請求項3又は4に記載のグルコシル-α-1,2-グリセロールホスホリラーゼをコードするベクター又は配列番号2記載のDNAを含むベクター。

[請求項6]
 請求項5記載のベクターにより形質転換された形質転換体。

[請求項7]
 請求項1~4のいずれか1項に記載のグルコシル-α-1,2-グリセロールホスホリラーゼの製造方法であって、請求項6記載の形質転換体を培養する工程と、前記培養する工程において生産されたグルコシル-α-1,2-グリセロールホスホリラーゼを回収する工程を含む製造方法。

[請求項8]
 β-グルコース1-リン酸と、グリセロールと、請求項1~4のいずれか1項に記載のグルコシル-α-1,2-グリセロールホスホリラーゼを含む溶液中で酵素反応を行う工程と、グルコシル-α-1,2-グリセロールを回収する工程とを含むグルコシル-α-1,2-グリセロールの製造方法。

[請求項9]
 β-グルコース1-リン酸を生成する糖質加リン酸分解酵素及びその基質となる糖と、グリセロールと、リン酸と、請求項1~4のいずれか1項に記載のグルコシル-α-1,2-グリセロールホスホリラーゼを含む溶液中で酵素反応を行う工程と、グルコシル-α-1,2-グリセロールを回収する工程とを含むグルコシル-α-1,2-グリセロールの製造方法。

[請求項10]
 β-グルコース1-リン酸を生成する糖質加リン酸分解酵素及びその基質となる糖の組み合わせが、マルトースホスホリラーゼ(EC 2.4.1.8)及びマルトースとの組み合わせ、トレハロースホスホリラーゼ(EC 2.4.1.64)及びトレハロースとの組み合わせ、コウジビオースホスホリラーゼ(EC 2.4.1.230)及びコウジビオースとの組み合わせ、ニゲロースホスホリラーゼ(EC 2.4.1.279)及びニゲロースとの組み合わせ、よりなる群から選択される1つ以上の組み合わせである、請求項9に記載のグルコシル-α-1,2-グリセロールの製造方法。

[請求項11]
 前記溶液がpH4.5~9.5である請求項8~10のいずれか1項に記載のグルコシル-α-1,2-グリセロールの製造方法。

  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • NIIGATA UNIVERSITY
  • Inventor
  • NAKAI, Hiroyuki
  • NIHIRA, Takanori
  • SAITO, Yuka
  • OHTSUBO, Kenichi
  • KITAOKA, Motomitsu
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IR IS KE KG KN KP KR KZ LA LC LK LR LS LT LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SA SC SD SE SG SK SL SM ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW KM ML MR NE SN TD TG
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