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METHOD FOR REFOLDING ANTIBODY, PROCESS FOR PRODUCING REFOLDED ANTIBODY, REFOLDED ANTIBODY, AND USES THEREOF meetings

Foreign code F150008111
File No. S2013-0526-C0
Posted date Feb 9, 2015
Country WIPO
International application number 2014JP052475
International publication number WO 2014125955
Date of international filing Feb 3, 2014
Date of international publication Aug 21, 2014
Priority data
  • P2013-027862 (Feb 15, 2013) JP
Title METHOD FOR REFOLDING ANTIBODY, PROCESS FOR PRODUCING REFOLDED ANTIBODY, REFOLDED ANTIBODY, AND USES THEREOF meetings
Abstract The present invention provides a method for refolding an antibody, a process for producing a refolded antibody, a refolded antibody, and uses of these. This method, which is for refolding an antibody in a liquid phase, and the process for producing a refolded antibody each comprise: a step in which an inert antibody having a peptide coupled thereto directly or through a linker is modified, the peptide having a lower isoelectric point than the inert antibody; and a step in which the inert antibody which has a peptide coupled thereto and which has been modified in the above-mentioned step is dispersed in a liquid phase.
Outline of related art and contending technology BACKGROUND ART
Conventional, bio, pharmaceutical, food including antibodies have been widely used in various fields are. Specific to each antibody and has an activity, its activity on the basis of the selected antibodies according to the purpose, used. In addition, a method of producing antibodies are well-known and, also to mass-produce the desired antibody can be realized.
However, defects of the prior art is provided with a sufficient activity is not always antibody is obtained. For example, recombinant E. coli as a host such as in the case of producing antibodies that, most often obtained as it is inert to the antibody. Antibody with the desired activity in order to acquire a, further inert obtained for an antibody which is necessary to perform the refolding operation.
With respect to the refolding in this case, for example, arginine, reduced glutathione, oxidized glutathione containing denatured protein in a refolding buffer comprising the step of dropping, a method of refolding of the denatured protein have been reported (patent document 1). In addition, in the presence of a surfactant comprising the step of membrane protein in the refolding method have been reported (patent document 2). In addition, the metal chelating ligand coordinated to a metal ion bound to a solid phase containing the peptide having the bonded portion of the solid phase through a chelate bond is adsorbed on the surface after, refolding the peptide on a solid phase surface can be reported (Patent Document 3). In addition, a particular peptide is adsorbed on the surface after the solid phase, three-dimensional structure of the peptide on a solid phase surface can be restored have been reported (Patent Document 4, 5).
In this way, various processes have been reported so far but refolding, the refolding efficiency is low in a conventional manner.
Scope of claims (In Japanese)請求の範囲 [請求項1]
(1-1)ペプチドが直接またはリンカーを介して連結されてなる不活性な抗体を変性させる工程、ここで該ペプチドは、該不活性な抗体の等電点よりも低い等電点を有する、及び、
(1-2)前記工程(1-1)において変性した、前記ペプチドが連結されなる不活性な抗体を、液相に分散させる工程、
を含む、液相中での抗体のリフォールディング方法。

[請求項2]
抗体が1本鎖抗体、Fab断片、F(ab’)2断片、単ドメイン抗体、多価性1本鎖抗体、定常部融合1本鎖抗体及び完全長抗体からなる群より選択される少なくとも1種である、請求項1に記載のリフォールディング方法。

[請求項3]
前記ペプチドの等電点が8.5以下である、請求項1または2に記載のリフォールディング方法。

[請求項4]
(2-1)ペプチドが直接またはリンカーを介して連結されてなる不活性な抗体を変性させる工程、ここで該ペプチドは、該不活性な抗体の等電点よりも低い等電点を有する、及び、
(2-2)前記工程(2-1)において変性した、前記ペプチドが連結されてなる不活性な抗体を、液相に分散させる工程、
を含む、リフォールディングされた抗体の製造方法。

[請求項5]
抗体が1本鎖抗体、Fab断片、F(ab’)2断片、単ドメイン抗体、多価性1本鎖抗体、定常部融合1本鎖抗体及び完全長抗体からなる群より選択される少なくとも1種である、請求項4に記載の製造方法。

[請求項6]
前記ペプチドの等電点が8.5以下である、請求項4または5に記載の製造方法。

[請求項7]
前記リンカーが、基材に対して親和性を有するペプチドである、請求項4~6のいずれかに記載の製造方法。

[請求項8]
請求項4~7のいずれかに記載の製造方法によって得られる、リフォールディングされた抗体。

[請求項9]
請求項1~3のいずれかに記載の方法によってリフォールディングされた抗体及び/または請求項4~7のいずれかに記載の製造方法によって得られたリフォールディングされた抗体を、基材に接触させる工程を含有する、リフォールディングされた抗体の基材への固定化方法。

[請求項10]
抗体に連結されたペプチドを介して、抗体が基材に固定される、請求項9に記載の固定化方法。

[請求項11]
前記不活性な抗体の等電点よりも低い等電点を有するペプチドが以下の(a)または(b)に示すペプチドであり、基材がポリカーボネート及びポリメタクリル酸メチルからなる群より選択される少なくとも1種である、請求項9または10に記載の固定化方法、
(a)配列番号1~4のいずれかで表されるアミノ酸配列からなるペプチド、
(b)前記(a)のアミノ酸配列において1または複数のアミノ酸が欠失、置換及び/または付加されたアミノ酸配列からなり、且つ、ポリカーボネート及びポリメタクリル酸メチルからなる群より選択される少なくとも1種に親和性を有するペプチド。

[請求項12]
請求項9~11のいずれかに記載の固定化方法によってリフォールディングされた抗体が固定されてなる、基材。

[請求項13]
ペプチドが直接またはリンカーを介して連結されてなる不活性な抗体を含有する、液相中での抗体のリフォールディング用組成物、ここで該ペプチドは、該不活性な抗体の等電点よりも低い等電点を有する。

[請求項14]
更に、前記ペプチドが連結されなる不活性な抗体の等電点よりもpHが0.5以上高い溶液を含有する、請求項13に記載の組成物。

[請求項15]
抗体をコードするポリヌクレオチドと、該抗体の等電点より低い等電点を有するペプチドをコードするポリヌクレオチドとが直接またはリンカーを介して連結されてなる、液相中での抗体のリフォールディング用ペプチド連結抗体発現ベクター。

[請求項16]
請求項15に記載のベクターを宿主細胞に導入して形質転換させることにより得られる形質転換体。

[請求項17]
請求項16に記載の形質転換体から得られる、ペプチドが連結されてなる抗体。

[請求項18]
アスパラギン酸残基からなるペプチドが直接またはリンカーを介して連結されてなる抗体、ここで該ペプチドは、該不活性な抗体の等電点よりも低い等電点を有する。

[請求項19]
前記抗体が、不活性な抗体またはリフォールディングされた抗体である、請求項18に記載の抗体。

  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • NATIONAL UNIVERSITY CORPORATION KYOTO INSTITUTE OF TECHNOLOGY
  • Inventor
  • KUMADA, Yoichi
  • ISHIKAWA, Yasuyuki
  • FUJIWARA, Yusuke
  • KISHIMOTO, Michimasa
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IR IS JP KE KG KN KP KR KZ LA LC LK LR LS LT LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SA SC SD SE SG SK SL SM ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW KM ML MR NE SN TD TG
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