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METHOD FOR INDUCING DIFFERENTIATION OF INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS INTO INTESTINAL EPITHELIAL CELLS

Foreign code F150008296
File No. S2013-0597-C0
Posted date Apr 10, 2015
Country WIPO
International application number 2014JP054379
International publication number WO 2014132933
Date of international filing Feb 24, 2014
Date of international publication Sep 4, 2014
Priority data
  • P2013-036434 (Feb 26, 2013) JP
Title METHOD FOR INDUCING DIFFERENTIATION OF INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS INTO INTESTINAL EPITHELIAL CELLS
Abstract The purpose of the present invention is to provide a novel method for efficiently inducing the differentiation of induced pluripotent stem cells into intestinal epithelial cells, and a use thereof. The differentiation of induced pluripotent stem cells into intestinal epithelial cells is induced by: a step in which induced pluripotent stem cells are differentiated into endoderm-like cells; a step in which the endoderm-like cells obtained at the aforementioned step are differentiated into intestinal stem cell-like cells; and a step in which the intestinal stem cell-like cells obtained at the aforementioned step are differentiated into intestinal epithelial cell-like cells, said step including culturing in the presence of EGF and at least one compound selected from the group consisting of MEK1 inhibitors, DNA methylation inhibitors, and TFGβ receptor inhibitors.
Scope of claims (In Japanese)[請求項1]
以下の工程(1)~(3)を含む、人工多能性幹細胞を腸管上皮細胞へ分化誘導する方法:
(1)人工多能性幹細胞を内胚葉様細胞へと分化させる工程;
(2)工程(1)で得られた内胚葉様細胞を腸管幹細胞様細胞へと分化させる工程;
(3)工程(2)で得られた腸管幹細胞様細胞を腸管上皮細胞様細胞へと分化させる工程であって、MEK1阻害剤、DNAメチル化阻害剤及びTGFβ受容体阻害剤からなる群より選択される一以上の化合物とEGFの存在下での培養を含む工程。
[請求項2]
工程(3)の前記培養を、MEK1阻害剤、DNAメチル化阻害剤、TGFβ受容体阻害剤及びEGFの存在下で行う、請求項1に記載の方法。
[請求項3]
工程(3)の前記培養の期間が7日間~30日間である、請求項1又は2に記載の方法。
[請求項4]
MEK1阻害剤がPD98059であり、DNAメチル化阻害剤が5-アザ-2’-デオキシシチジンであり、TGFβ受容体阻害剤がA-83-01である、請求項1~3のいずれか一項に記載の方法。
[請求項5]
工程(1)における分化誘導因子としてアクチビンAを用いる、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。
[請求項6]
工程(2)における分化誘導因子としてFGF2を用いる、請求項1~5のいずれか一項に記載の方法。
[請求項7]
工程(3)が、以下の工程(3-1)及び(3-2)からなる、請求項1~6のいずれか一項に記載の方法:
(3-1)工程(2)で得られた腸管幹細胞様細胞をGSK阻害剤及び/又はBMP阻害剤とEGFの存在下で培養する工程;
(3-2)工程(3-1)に続いて、MEK1阻害剤、DNAメチル化阻害剤及びTGFβ受容体阻害剤からなる群より選択される一以上の化合物とEGFの存在下で培養する工程。
[請求項8]
工程(3-1)の培養期間は3日間~14日間であり、工程(3-2)の培養期間は3日間~21日間である、請求項7に記載の方法。
[請求項9]
GSK阻害剤がGSK3iXVであり、BMP阻害剤がドルソモルフィンである、請求項7又は8に記載の方法。
[請求項10]
人工多能性幹細胞がヒト人工多能性幹細胞である、請求項1~9のいずれか一項に記載の方法。
[請求項11]
請求項1~10のいずれか一項に記載の方法で得られた腸管上皮細胞様細胞。
[請求項12]
請求項11に記載の腸管上皮細胞様細胞を用いた、被検物質の体内動態を評価する方法。
[請求項13]
以下の工程(i)~(iii)を含む、請求項12に記載の方法:
(i)請求項11に記載の腸管上皮細胞様細胞で構成された細胞層を用意する工程;
(ii)前記細胞層に被検物質を接触させる工程;
(iii)前記細胞層を透過した被検物質を定量し、被検物質の吸収性ないし膜透過性を評価する工程。
[請求項14]
以下の工程(I)及び(II)を含む、請求項12に記載の方法:
(I)請求項11に記載の腸管上皮細胞様細胞に被検物質を接触させる工程;
(II)被検物質の代謝又は吸収を測定・評価する工程。
[請求項15]
請求項11に記載の腸管上皮細胞様細胞を含む、細胞製剤。
  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • NAGOYA CITY UNIVERSITY
  • Inventor
  • IWAO TAKAHIRO
  • MATSUNAGA TAMIHIDE
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IR IS JP KE KG KN KP KR KZ LA LC LK LR LS LT LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SA SC SD SE SG SK SL SM ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW KM ML MR NE SN TD TG
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