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METHOD FOR CULTURING PLURIPOTENT STEM CELL

Foreign code F150008445
File No. 3526
Posted date Oct 21, 2015
Country WIPO
International application number 2012JP080364
International publication number WO 2013077423
Date of international filing Nov 22, 2012
Date of international publication May 30, 2013
Priority data
  • 61/563,643P (Nov 25, 2011) US
Title METHOD FOR CULTURING PLURIPOTENT STEM CELL
Abstract The present invention provides a method for maintaining and amplifying a pluripotent stem cell, characterized by repeating (i) a step of subjecting the pluripotent stem cell to floating culture until the average diameter of cell mass produced by the floating culture reaches about 200 to about 300 μm and (ii) a step of dividing the cell mass produced in step (i) into uniform cell masses having an average diameter of about 80 to about 120 μm. In step (i), a culture medium is imparted with a proper viscosity for the purpose of preventing the movement of floating cell masses and the adhesion and fusion of the cell masses to each other. In step (ii), a cell suspension is allowed to pass through a mesh, whereby the cell mass can be divided into smaller and uniform cell masses mechanically.
Scope of claims (In Japanese)[請求項1]
以下の工程を繰り返すことを特徴とする、多能性幹細胞の維持増幅方法。
(i) 多能性幹細胞を、細胞塊の平均直径が約200-約300 μmとなるまで浮遊培養する工程
(ii) 工程(i)により得られた細胞塊を、平均直径が約80-約120 μmである均一な細胞塊に分割する工程
[請求項2]
工程(i)において、多能性幹細胞を、細胞塊の平均直径が約250 μmとなるまで浮遊培養し、工程(ii)において、平均直径が約80 μmである均一な細胞塊に分割することを特徴とする、請求項1記載の方法。
[請求項3]
工程(ii)における分割が、細胞塊をメッシュに通すことにより行われることを特徴とする、請求項1または2記載の方法。
[請求項4]
メッシュの孔径が約30-約70 μm、好ましくは約40-約60 μm、より好ましくは約50 μmである、請求項3記載の方法。
[請求項5]
工程(i)の培養が、細胞塊同士の接着を起こさない粘度を持つ水溶性高分子成分を含む培地中で行われる、請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。
[請求項6]
水溶性高分子が、多糖もしくはそのエーテル、合成ハイドロゲル高分子および生体高分子、並びにそれらを模倣した人工高分子から選ばれる、請求項5記載の方法。
[請求項7]
水溶性高分子がメチルセルロースまたは昇温型温度感受性ハイドロゲルである、請求項5記載の方法。
[請求項8]
多能性幹細胞がES細胞またはiPS細胞である、請求項1~7のいずれか1項に記載の方法。
[請求項9]
多能性幹細胞がヒト由来である、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。
  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • KYOTO UNIVERSITY
  • Inventor
  • NAKATSUJI NORIO
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IS JP KE KG KM KN KP KR KZ LA LC LK LR LS LT LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SC SD SE SG SK SL SM ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW ML MR NE SN TD TG
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