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PEPTIDE/β-1,3-GLUCAN COMPLEX AND PRODUCTION METHOD THEREFOR, AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING PEPTIDE/β-1,3-GLUCAN COMPLEX

Foreign code F150008549
File No. AF11-11WO
Posted date Nov 26, 2015
Country WIPO
International application number 2014JP084374
International publication number WO 2015118789
Date of international filing Dec 25, 2014
Date of international publication Aug 13, 2015
Priority data
  • P2014-021333 (Feb 6, 2014) JP
Title PEPTIDE/β-1,3-GLUCAN COMPLEX AND PRODUCTION METHOD THEREFOR, AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING PEPTIDE/β-1,3-GLUCAN COMPLEX
Abstract This peptide/β-1,3-glucan complex contains β-1,3-glucan and a peptide/polynucleotide conjugate in which an antigenic peptide is bonded via a covalent bond to a polynucleotide or a derivative thereof. The polynucleotide or derivative thereof of the peptide/polynucleotide conjugate bonds via a hydrogen bond with β-1,3-glucan, forming a complex having a triple helix structure comprising a single molecular chain of the polynucleotide or derivative thereof and a double molecular chain of the β-1,3-glucan. Alternately, the side chain of the β-1,3-glucan and the antigenic peptide are bonded via a covalent bond created through either a cycloaddition reaction between an alkyne and an azide derivative, or a reaction between a maleimide group or a vinyl sulfone group and a thiol group.
Outline of related art and contending technology BACKGROUND ART
Is the basic principle of the vaccine preventing infection, human pseudo-infection, to induce acquired immunity, against certain pathogens antibody production or to induce cell-mediated immunity. In acquired immunity, immunity is responsible for ' storage'T cells and B cells play a central role, by reconstruction DNA that the diversity of the variable regions of an antibody, specific to an antigen for an infinite number allows an immunological reaction are known. On the other hand, leukocytes, macrophages, dendritic cells such as phagocytic cells play a central role in the innate immunity is, conventional, phagocytose pathogens or foreign matter and non-specific processes, established immune to '' serves only as a is thought to play a, the progress of the studies related to the molecular mechanism of innate immunity, innate immunity in the, self, non-self-specific recognition by the part and the, the point-to-innate immune adaptive immune was demonstrated to be essential. More specifically, dendritic cells, macrophages, antigen presenting cells such as B Toll-like receptor (TLR) present in the family, react with the various etiologic agents, induces the production of cytokines, naive T cells to promote differentiation to Th1 cells, such as the activation of killer T cells through, to induce immune, a recent study has revealed.
A series of TLR family that is recognized by a component of a pathogen-state laser, in which one of 1, TLR9 is a ligand, which has the sequence CpG DNA. CpG sequences, guanine and cytosine (C) the center (g) are arranged in the base sequence of 6 bases, in a mammal to a less extent, frequently in microorganisms include the nucleotide sequence. In addition, in a mammal, most of the present few CpG sequences are methylated. There is little in mammalian non-methylated CpG sequence, has a strong immunostimulatory activity (for example, see non-patent document 1-3). Is captured within the cell by endocytosis CpG DNA, present in the phagosome to the endoplasmic reticulum as recognized by the TLR9, Th1 to strongly induce the reaction. Th1 The reaction is carried out, to suppress the allergic reaction Th2 with predominance, strong have anti-tumor activity. Therefore, CpG DNA is, in addition to the prevention of infection, allergic diseases, tumor diseases are expected to be used as adjuvants (for example see non-patent document 4).
However, when used as an adjuvant to the immune therapy CpG DNA, and nuclease degradation in the cytoplasm or in the plasma, the unspecific binding of the protein while avoiding, how to reach the interior of a target cell CpG DNA becomes a problem.
The inventors of the present invention, a new gene β - 1 as a carrier, a polysaccharide having 3 - glucan skeleton (hereinafter, 'β - 1, 3 - glucan' is abbreviated.) Focusing on, so far, β - 1, 3 - glucan (antisense DNA, CpG DNA) a nucleic acid drug including a variety of nucleic acid and a new type of complex has been found to form (for example, Patent Document 1, 2, see non-patent document 5-7).
3 Β - 1 naturally present in the double helix, 3 - glucans, such as dimethyl sulfoxide (DMSO) non-polar protic organic solvent, or dissolved in a more alkali 0.1N 1 after dissociation of a double stranded, single-stranded nucleic acid 1 was added, by returning the solvent water or neutral, 1 nucleic acid molecule β - 1, the double helix glucan 2 3 3 - and molecules the inventors found that a complex is formed. In this case, the double helix β - 1 in complex with 3, 3 - glucan molecule nucleic acid molecules, mainly through hydrophobic interaction and hydrogen bonding to form intermolecular bonds believed (see non-patent document 8).
As described above, nucleic acid β - 1, 3 - glucans by compounding, hydrolysis or of the nucleic acid molecule by a nuclease, nonspecific binding of plasma proteins and nucleic acids such as, protein and nucleic acid molecules in vivo while suppressing undesirable interactions, to reach the interior of the cell the nucleic acid has become possible. Β - 1, glucan and the nucleic acid complex of 3 -, 3 and further comprising a protein having antigenicity using the ternary complex, intracellular CpG DNA delivery to a successful (for example, Patent Document 3, 4, see non-patent document 9-11).
Scope of claims (In Japanese)請求の範囲 [請求項1]
 β-1,3-グルカン骨格を有する多糖と、
 前記β-1,3-グルカン骨格を有する多糖に化学結合した抗原性を有するペプチドとを含むことを特徴とするペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項2]
 前記β-1,3-グルカン骨格を有する多糖が、シゾフィラン、レンチナン、スクレログルカン及びカードランのいずれかであることを特徴とする請求項1記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項3]
 β-1,3-グルカン骨格を有する多糖と、
 抗原性を有するペプチドが、ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体と共有結合を介して結合したペプチド/ポリヌクレオチドコンジュゲートとを含み、
 前記ペプチド/ポリヌクレオチドコンジュゲートのポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体が、前記β-1,3-グルカン骨格を有する多糖と、水素結合を介して結合し、前記ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体の分子鎖1本と前記β-1,3-グルカン骨格を有する多糖の分子鎖2本とからなる三重螺旋構造を有する複合体を形成していることを特徴とするペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項4]
 前記β-1,3-グルカン骨格を有する多糖が、シゾフィラン、レンチナン、スクレログルカン及びカードランのいずれかであることを特徴とする請求項3記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項5]
 前記ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体がポリデオキシアデノシンであることを特徴とする請求項3又は4記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項6]
 前記ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体が、DNA又はRNAのホスホジエステル結合の少なくとも一部がホスホロチオエート基で置換されたポリヌクレオチド誘導体であることを特徴とする請求項3から5のいずれか1項記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項7]
 前記DNA又はRNAのホスホジエステル結合のうち少なくとも一部がホスホロチオエート基で置換されたポリヌクレオチド誘導体において、ホスホジエステル結合の50%以上がホスホロチオエート基で置換されていることを特徴とする請求項6記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項8]
 前記ペプチド/ポリヌクレオチドコンジュゲートを構成する前記抗原性を有するペプチドと前記ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体とが、アルキンとアジド誘導体との付加環化反応、マレイミド基とチオール基との反応、ペプチドC末端のシステイン残基のチオール基とチオール修飾核酸のチオール基との反応のいずれかにより生成した共有結合を介して結合していることを特徴とする請求項3から7のいずれか1項記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項9]
 β-1,3-グルカン骨格を有する多糖と、
 アルキンとアジド誘導体との付加環化反応、マレイミド基又はビニルスルホン基とチオール基との反応のいずれかにより生成した共有結合を介して、前記β-1,3-グルカン骨格を有する多糖の主鎖又は側鎖上のグルコース残基に結合した抗原性を有するペプチドとを含むことを特徴とするペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項10]
 前記β-1,3-グルカン骨格を有する多糖が、シゾフィラン、レンチナン、スクレログルカン及びカードランのいずれかであることを特徴とする請求項8又は9記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項11]
 請求項1から10のいずれか1項記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体において、
 免疫賦活活性を有する部分塩基配列を有するポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体を更に含み、
 前記ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体が、前記β-1,3-グルカン骨格を有する多糖と、水素結合を介して結合し、前記ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体の分子鎖1本と前記β-1,3-グルカン骨格を有する多糖の分子鎖2本とからなる三重螺旋構造を有する複合体を形成していることを特徴とするペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項12]
 前記ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体の、前記三重螺旋構造を有する複合体を形成する部分がポリデオキシアデノシンであることを特徴とする請求項11記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項13]
 前記ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体の、前記三重螺旋構造を有する複合体を形成する部分が、DNA又はRNAのホスホジエステル結合の少なくとも一部がホスホロチオエート基で置換されたポリヌクレオチド誘導体であることを特徴とする請求項11又は12記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項14]
 前記ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体の、前記三重螺旋構造を有する複合体を形成する部分において、DNA又はRNAのホスホジエステル結合の50%以上がホスホロチオエート基で置換されていることを特徴とする請求項13記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体。

[請求項15]
 請求項8記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体を製造する方法であって、前記ペプチド/ポリヌクレオチドコンジュゲートの液体クロマトグラフィーによる分離をキレート剤の存在下で行うことを特徴とするペプチド/β-1,3-グルカン複合体の製造方法。

[請求項16]
 免疫賦活活性を有する部分塩基配列を有するポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体と、
 請求項1から10のいずれか1項記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体とを含む医薬組成物。

[請求項17]
 前記ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体が、β-1,3-グルカン骨格を有する多糖と、水素結合を介して結合し、前記ポリヌクレオチド又はポリヌクレオチド誘導体の分子鎖1本と前記β-1,3-グルカン骨格を有する多糖の分子鎖2本とからなる三重螺旋構造を有するポリヌクレオチド/β-1,3-グルカン複合体を形成していることを特徴とする請求項16記載の医薬組成物。

[請求項18]
 前記ポリヌクレオチド/β-1,3-グルカン複合体を構成する前記β-1,3-グルカン骨格を有する多糖が、シゾフィラン、レンチナン、スクレログルカン及びカードランのいずれかであることを特徴とする請求項17記載の医薬組成物。

[請求項19]
 請求項11から14のいずれか1項記載のペプチド/β-1,3-グルカン複合体を含む医薬組成物。

  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • JAPAN SCIENCE AND TECHNOLOGY AGENCY
  • Inventor
  • SAKURAI Kazuo
  • MOCHIZUKI Shin-ichi
  • MORISHITA Hiromi
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IR IS JP KE KG KN KP KR KZ LA LC LK LR LS LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SA SC SD SE SG SK SL SM ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW KM ML MR NE SN ST TD TG
Reference ( R and D project ) CREST Development of the Foundation for Nano-Interface Technology AREA
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