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CANCER DETECTION METHOD EMPLOYING BIOLOGICAL TISSUE FRAGMENT, AND METHOD FOR SUSTAINING CELLS IN BIOLOGICAL TISSUE FRAGMENT EX VIVO

Foreign code F150008558
File No. (S2014-0432-N0)
Posted date Nov 26, 2015
Country WIPO
International application number 2015JP052350
International publication number WO 2015115478
Date of international filing Jan 28, 2015
Date of international publication Aug 6, 2015
Priority data
  • P2014-015735 (Jan 30, 2014) JP
Title CANCER DETECTION METHOD EMPLOYING BIOLOGICAL TISSUE FRAGMENT, AND METHOD FOR SUSTAINING CELLS IN BIOLOGICAL TISSUE FRAGMENT EX VIVO
Abstract A purpose of the present invention is to provide a method for imaging cancer in a fresh tissue sample, as a substitute for, or a complement to, an H&E stained specimen during cancer diagnosis. Another purpose of the present invention is to provide a method for maintaining biological tissue fragments in the living state ex vivo. Provided is a method in which a tissue fragment collected from a living body is treated for at least 30 minutes or more at a temperature of 29-33°C, and thereafter brought to 35.5-37.5°C, whereby the biological functions of the tissue can be maintained in the normal state. Also provided is a method for detecting cancer in a biological tissue fragment through imaging, by treating the tissue in the presence of 2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino]-2-deoxy-L-glucose (2-NBDLG).
Scope of claims (In Japanese)[請求項1]
生体由来組織片中のがんを検出するための方法であって、以下の工程、
a.生体から採取した組織片を、29~33℃の温度にて少なくとも30分以上処理する工程、
b.前記工程aで処理した組織片を、35.5~37.5℃の温度にて、蛍光分子団として7-ニトロベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾール基又はその誘導体を分子内に有するL-グルコース誘導体の存在下で処理する工程、および
c.組織片中の細胞内に存在する該L-グルコース誘導体を検出する工程、
を含む検出方法。
[請求項2]
前記L-グルコース誘導体が、2-[N-(7-ニトロベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル)アミノ]-2-デオキシ-L-グルコース(2-NBDLG)である請求項1に記載の検出方法。
[請求項3]
工程aが、生体から採取した組織片を、約0℃に冷却した後、29~33℃の温度にて少なくとも30分以上処理する工程である、請求項1または2に記載の方法。
[請求項4]
前記工程bにおける処理時間が20分以内の時間であり、そして、工程cにおける検出が、蛍光強度の時間経過による変化を指標として行う、請求項1~3のいずれか一つに記載の検出方法。
[請求項5]
生体由来組織片中のがんを検出するための方法であって、以下の工程、
a.生体から採取した組織片を、29~33℃の温度にて少なくとも30分以上処理する工程、
b.前記工程aで処理した組織片を、35.5~37.5℃の温度にて、2-[N-(7-ニトロベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル)アミノ]-2-デオキシ-L-グルコース(2-NBDLG)および2位にスルホローダミン101をスルホンアミド結合した2-アミノ-2-デオキシ-L-グルコース(2-TRLG)の存在下で処理するする工程、および
c.組織片中の細胞内に存在する2-NBDLGおよび/または2-TRLGを検出する工程、
を含む検出方法。
[請求項6]
工程aが、生体から採取した組織片を、約0℃に冷却した後、29~33℃の温度にて少なくとも30分以上処理する工程である、請求項5に記載の方法。
[請求項7]
前記工程bにおける処理を20分以内で行う請求項5または6に記載の検出方法。
[請求項8]
前記工程bにおける処理を10分以内で行う請求項7に記載の検出方法。
[請求項9]
前記工程cにおける検出が、蛍光イメージングされた細胞の蛍光色調の時間経過による変化を指標にして行う、請求項5~8のいずれか一つに記載の検出方法。
[請求項10]
前記工程bの後に、組織片を約0℃において1~24時間保存した後、工程cを行う、請求項1~9に記載の方法。
[請求項11]
前記組織片が、胃、食道、胆道、大腸、子宮、子宮頸部、膣、膀胱、および前立腺からなる群より由来する組織片である、請求項1~10に記載の方法。
[請求項12]
生体由来組織片中の細胞内に存在するL-グルコース誘導体を検出することによりがんを検出する方法であって、該生体由来組織片が、以下の工程:
a.生体から採取した組織片を、29~33℃の温度にて少なくとも30分以上処理する工程、および
b.前記工程aで処理した組織片を、35.5~37.5℃の温度にて、2-[N-(7-ニトロベンズ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル)アミノ]-2-デオキシ-L-グルコース(2-NBDLG)および2位にスルホローダミン101をスルホンアミド結合した2-アミノ-2-デオキシ-L-グルコース(2-TRLG)の存在下で処理する工程、
により調製され、かつ、約0℃にて1~24時間保存されたものである、
がんを検出する方法。
[請求項13]
工程aが、生体から採取した組織片を、約0℃に冷却した後、29~33℃の温度にて少なくとも30分以上処理する工程である、請求項12に記載の方法。
[請求項14]
細胞内のL-グルコース誘導体の検出を行った後に、さらに組織片から病理標本を作製して病理標本に基づくがんの検出を行う、請求項1~13のいずれか一つに記載の方法。
[請求項15]
前記L-グルコース誘導体の検出が寒天中に固定された組織片を用いて行う、請求項14に記載の方法。
[請求項16]
生体由来の組織片中の細胞を生きた状態に維持する方法であって、以下の工程、
a.生体から採取した組織片を、29~33℃の温度にて少なくとも30分以上処理する工程、および
b.前記工程aで処理した組織片を35.5~37.5℃の温度にて処理して、細胞を生きた状態に維持する工程、
を含む細胞維持方法。
[請求項17]
工程aが、生体から採取した組織片を、約0℃に冷却した後、29~33℃の温度にて少なくとも30分以上処理する工程である、請求項16に記載の方法。
[請求項18]
前記組織片が、生体の管腔および内腔からなる群より選ばれる請求項16または17に記載の方法。
[請求項19]
前記組織片が、胃、食道、胆道、大腸、子宮、子宮頸部、膣、膀胱、および前立腺からなる群より選ばれる請求項18に記載の方法。
[請求項20]
請求項1~15のいずれかの検出方法において、工程bにおいてまたは工程bの後に、任意の化合物の存在下で組織を処理することにより、該化合物のがん細胞に対する効果を評価することを、含むスクリーニング方法。
  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • HIROSAKI UNIVERSITY
  • Inventor
  • YAMADA KATSUYA
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IR IS JP KE KG KN KP KR KZ LA LC LK LR LS LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SA SC SD SE SG SK SL SM ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW KM ML MR NE SN TD TG

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