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TRANSFORMANT, METHOD FOR PRODUCING TRANSFORMANT, AND METHOD FOR DETECTING PRESENCE OR ABSENCE OF REDUCED PHOSPHORUS COMPOUND USING TRANSFORMANT

Foreign code F180009495
File No. S2016-0948-C0
Posted date Nov 1, 2018
Country WIPO
International application number 2017JP027588
International publication number WO 2018042987
Date of international filing Jul 31, 2017
Date of international publication Mar 8, 2018
Priority data
  • P2016-170317 (Aug 31, 2016) JP
Title TRANSFORMANT, METHOD FOR PRODUCING TRANSFORMANT, AND METHOD FOR DETECTING PRESENCE OR ABSENCE OF REDUCED PHOSPHORUS COMPOUND USING TRANSFORMANT
Abstract The purpose of the present invention is to provide a transformant, which has an excellent sealing effect and can be prepared by a simple process, a method for producing the transformant and a method for detecting the presence or absence of a reduced phosphorus compound with the use of the transformant. For this purpose, the transformant according to the present invention lacks the function of a gene encoding a phosphoric acid transporter protein and the function of a gene encoding a phosphate transporter protein and carries a gene, said gene encoding a hypophosphorous acid transporter protein, transferred thereinto.
Outline of related art and contending technology BACKGROUND ART
In recent years, can be applied to a wide variety of applications to produce the recombinant organism. Genetically engineered organism is made, for example, oral vaccine, or, for the purpose of improvement of the environment is expected to be used.
On the other hand, in order to actually use the genetically engineered biological, some condition. As one of conditions 1, only in a limited location and growth, the growth in biological genetic recombination cannot be other than the location (in other words, the high confinement effects genetically engineered biological) needs to be made. If such a transgenic organism, the naturally occurring biological genetic recombination even if the leakage, the transgenic organism cannot be grown in a naturally occurring, genetically engineered biological nature by the contamination can be prevented.
In this way for making such transgenic organism a variety of methods have been developed and, as such a method, an organism (i) is introduced into the toxic gene, the gene for the desired time has passed and the toxicity of a method for killing the organism (suicide switch (kill switch)), and, the growth from an organism (ii) mandatory to live are deleted in the ability to synthesize a compound, supplied from the outside of the organism to survive by nutrients (auxotrophy) method can be exemplified.
However, (i) and (ii) the above method, the encapsulation effect is not sufficient, the high confinement effects further development of the method has been desired.
Under such circumstances, (iii) relative to a, in the natural world does not exist for a method of providing nutritional auxotrophy (synthetic auxotrophic (synthetic auxotrophy) ) is, the newly developed. (Iii) as a concrete example of the disclosed method, non-patent document 1 can be exemplified. In Non-Patent Document 1, does not exist in the natural world and artificially synthesized under an environment in which the amino acid can be grown in the presence of E. coli and a method of fabricating described. In this method, a large number of gene mutations in the E. coli by the introduction, purpose and produced in E. coli. Then, in the method of (iii), for example, 1011 genetically engineered biological nature of the assumed leaking out of the case, naturally the number of genetically engineered biological can survive, and the number 0.
Scope of claims (In Japanese)請求の範囲
[請求項1]
 リン酸輸送体タンパク質をコードする遺伝子、および、リン酸エステル輸送体タンパク質をコードする遺伝子の機能を欠損し、かつ、次亜リン酸輸送体タンパク質をコードする遺伝子が導入されており、リン酸を増殖に利用できず、かつ、亜リン酸を増殖に利用することができることを特徴とする形質転換体。
[請求項2]
 上記次亜リン酸輸送体タンパク質は、HtxBCDEタンパク質であり、以下の(1)~(3)の何れかのポリヌクレオチドからなる遺伝子にコードされるタンパク質のうちHtxAタンパク質を除くタンパク質からなるタンパク質、または、以下の(1)~(3)何れかのポリヌクレオチドからなる遺伝子にコードされるタンパク質のうちHtxAタンパク質を除くタンパク質を少なくとも一部分として含むタンパク質であることを特徴とする請求項1に記載の形質転換体:
(1)配列番号24で表される塩基配列からなるポリヌクレオチド;
(2)配列番号24で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、リン酸の輸送活性を有さず、還元型リン化合物の輸送活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド;または、
(3)配列番号24で表される塩基配列からなるポリヌクレオチドと配列同一性が90%以上のポリヌクレオチドからなり、かつ、リン酸の輸送活性を有さず、還元型リン化合物の輸送活性を有するタンパク質をコードするポリヌクレオチド。
[請求項3]
 更に、亜リン酸デヒドロゲナーゼタンパク質をコードする遺伝子が導入されていることを特徴とする請求項1または2に記載の形質転換体。
[請求項4]
 更に、アルカリホスファターゼタンパク質をコードする遺伝子の機能が欠損していることを特徴とする請求項1~3の何れか1項に記載の形質転換体。
[請求項5]
 上記形質転換体が、大腸菌の形質転換体であることを特徴とする請求項1~4の何れか1項に記載の形質転換体。
[請求項6]
 上記リン酸輸送体タンパク質は、PitAタンパク質、PitBタンパク質、PstSCABタンパク質、およびPhnCDEタンパク質からなる群より選択される少なくとも1つのタンパク質であることを特徴とする請求項5に記載の形質転換体。
[請求項7]
 上記リン酸エステル輸送体タンパク質は、UhpTタンパク質、UgpBタンパク質、およびGlpTタンパク質からなる群より選択される少なくとも1つのタンパク質であることを特徴とする請求項5または6に記載の形質転換体。
[請求項8]
 リン酸輸送体タンパク質をコードする遺伝子、および、リン酸エステル輸送体タンパク質をコードする遺伝子の機能を欠損し、かつ、HtxABCDEタンパク質をコードする遺伝子が導入されており、リン酸を増殖に利用できず、かつ、次亜リン酸を増殖に利用することができることを特徴とする形質転換体。
[請求項9]
 リン酸輸送体タンパク質をコードする遺伝子、および、リン酸エステル輸送体タンパク質をコードする遺伝子の機能を欠損した宿主に、次亜リン酸輸送体タンパク質をコードする遺伝子、または、HtxABCDEタンパク質をコードする遺伝子を導入する工程を有することを特徴とする形質転換体の製造方法。
[請求項10]
 請求項1~8の何れか1項に記載の形質転換体を、検出対象である培地を用いて培養する培養工程と、
 上記培養工程における上記形質転換体の増殖の有無を検出する検出工程と、を有することを特徴とする還元型リン化合物の有無の検出方法。
[請求項11]
 上記還元型リン化合物が、ホスホン酸であることを特徴とする請求項10に記載の還元型リン化合物の有無の検出方法。
  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • HIROSHIMA UNIVERSITY
  • Inventor
  • HIROTA, Ryuichi
  • KURODA, Akio
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DJ DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IR IS JO KE KG KH KN KP KR KW KZ LA LC LK LR LS LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SA SC SD SE SG SK SL SM ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW KM ML MR NE SN ST TD TG

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