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TECHNOLOGY FOR SELECTIVE PROTEIN SECRETION IN FUNGUS

Foreign code F180009503
File No. (S2017-0213-N0)
Posted date Nov 1, 2018
Country WIPO
International application number 2017JP046107
International publication number WO 2018123856
Date of international filing Dec 22, 2017
Date of international publication Jul 5, 2018
Priority data
  • P2016-252330 (Dec 27, 2016) JP
Title TECHNOLOGY FOR SELECTIVE PROTEIN SECRETION IN FUNGUS
Abstract The purpose of the present invention is to provide: a method for easily obtaining a culture supernatant having a reduced amount of unwanted enzymes; a microorganism that can be used in said method; and a method for producing a target substance using said microorganism. The present invention relates to a modified fungus that expresses a fusion polynucleotide in which a polynucleotide coding for a GPI-added signal sequence is joined to a polynucleotide coding for an endogenously secreted enzyme, and also relates to a method for producing a target substance using said modified fungus.
Outline of related art and contending technology BACKGROUND ART
Fungi, particularly filamentous fungi have a wide variety of enzymes for the production of secreted, the culture supernatant is used as the enzyme preparation. However, a fungal culture supernatant of the enzyme preparation in the case of using as, fungal enzyme undesirable from, for example decomposition of the objective substance into an enzyme that has become a problem. Undesirable enzyme from the culture supernatant is removed, and the like because of the need for purification or separation processes, is derived from fungal enzyme preparation, high cost, amount of production is difficult to stably supply 2 is not constant and is one major problem. In addition, it is not desirable as a method of reducing the amount of enzyme, the gene encoding the enzyme to break the lines may also be considered a method of using, in this method of fungal growth possibility is significantly reduced. Therefore, a significant proliferation of fungi without damaging, undesirable enzyme reducing the amount of the culture supernatant has been a need for a method to obtain.
On the other hand, the GPI (glycosylphosphatidylinositol), by post-translational modification of proteins are added to the end C and a lipid, a protein is immobilized on the surface of certain (anchor) cell having a function. Up to this point, the GPI, a cell surface protein in yeast can be used for the display are shown (in Patent Document 1), the enzyme secretion of endogenous GPI can be applied, it is not considered at all.
Scope of claims (In Japanese)請求の範囲
[請求項1]
 内在性分泌酵素をコードするポリヌクレオチドの3'末端側に、グリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)付加シグナル配列をコードする外来性ポリヌクレオチドが連結された融合ポリヌクレオチドを発現し、それによって、前記分泌酵素がGPIにより細胞表面に固定されたことを特徴とする改変真菌。
[請求項2]
 糸状菌に属する、請求項1に記載の真菌。
[請求項3]
 Trichoderma属、Aspergillus属、Penicillium属、Monascus属、及びThermoascus属からなる群から選択される糸状菌に属する、請求項2に記載の真菌。
[請求項4]
 Trichoderma reesei種に属する、請求項3に記載の真菌。
[請求項5]
 分泌酵素がグリコシダーゼ、リパーゼ、プロテアーゼ、及びヌクレアーゼからなる群から選択される、請求項1~4のいずれか一項に記載の真菌。
[請求項6]
 真菌が目的の物質の生産に用いられるものであり、目的の物質と分泌酵素が、以下の組み合わせ:
 (a)目的の物質が糖であり、分泌酵素がグリコシダーゼである;
 (b)目的の物質が脂質であり、分泌酵素がリパーゼである;
 (c)目的の物質がタンパク質であり、分泌酵素がプロテアーゼである;及び
 (d)目的の物質が核酸であり、分泌酵素がヌクレアーゼである;
からなる群から選択される、請求項1~5のいずれか一項に記載の真菌。
[請求項7]
 目的の物質がセロビオースであり、分泌酵素がβグルコシダーゼである、請求項6に記載の真菌。
[請求項8]
 請求項1~5のいずれか一項に記載の真菌を培地で培養する工程、及び
培養された該真菌から内在性分泌酵素の量が低減された培養上清を回収する工程
を含む、内在性分泌酵素の量が低減された真菌培養上清を生産する方法。
[請求項9]
 原料物質を、請求項1~5のいずれか一項に記載の真菌又は請求項8に記載の真菌培養上清と接触させ、原料物質から目的の物質を生産する工程
を含む、目的の物質を生産する方法。
[請求項10]
 目的の物質と分泌酵素が、以下の組み合わせ:
 (a)目的の物質が糖であり、分泌酵素がグリコシダーゼである;
 (b)目的の物質が脂質であり、分泌酵素がリパーゼである;
 (c)目的の物質がタンパク質であり、分泌酵素がプロテアーゼである;及び
 (d)目的の物質が核酸であり、分泌酵素がヌクレアーゼである;
請求項9に記載の方法。
[請求項11]
 目的の物質がセロビオースであり、分泌酵素がβグルコシダーゼである、請求項10に記載の方法。
[請求項12]
 目的の物質を回収する工程を含む、請求項9~11のいずれか一項に記載の方法。
[請求項13]
 内在性分泌酵素をコードするポリヌクレオチドの3'末端側に、グリコシルホスファチジルイノシトール(GPI)付加シグナル配列をコードする外来性ポリヌクレオチドが連結された融合ポリヌクレオチドを発現するように真菌を改変する工程を含む、前記分泌酵素がGPIにより細胞表面に固定された改変真菌の作製方法。
[請求項14]
 真菌がTrichoderma reesei種に属する、請求項13に記載の方法。
[請求項15]
 分泌酵素がグリコシダーゼ、リパーゼ、プロテアーゼ、及びヌクレアーゼからなる群から選択される、請求項13又は14に記載の方法。
  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • National university corporation Kagoshima University
  • KAKUI, CO., LTD.
  • Inventor
  • TAMAKI Hisanori
  • FUTAGAMI Taiki
  • IWAMOTO Masataka
IPC(International Patent Classification)
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