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EXO-β-1,2-GLUCANASE AND METHOD FOR PRODUCING SOPHOROSE

Foreign code F190009683
File No. (S2017-0585-N0)
Posted date Jan 22, 2019
Country WIPO
International application number 2018JP016001
International publication number WO 2018194092
Date of international filing Apr 18, 2018
Date of international publication Oct 25, 2018
Priority data
  • P2017-082216 (Apr 18, 2017) JP
Title EXO-β-1,2-GLUCANASE AND METHOD FOR PRODUCING SOPHOROSE
Abstract Provided is exo-β-1,2-glucanase which is one member selected from among: exo-β-1,2-glucanase acting on linear β-1,2-glucan to form sophorose; (a) a protein comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1; (b) a protein comprising an amino acid sequence derived from the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 by deletion of the amino acid residues at the 1-18 positions; (c) a protein comprising an amino acid sequence derived from the amino acid sequence of (a) or (b) by substitution, deletion or addition of one to several amino acid residues and having exo-β-1,2-glucanase activity; and (d) a protein showing a 90% or more sequence identity to the amino acid sequence of (a) or (b) and having exo-β-1,2-glucanase activity. Also provided is a method for producing sophorose with the use of exo-β-1,2-glucanase.
Outline of related art and contending technology BACKGROUND ART
In recent years, the cellulosic biomass as a raw material when producing bioethanol, Trichoderma cellulases produced from Rhoma (Trichoderma) has been widely used. Trichoderma fungal cellulase in order to improve the production efficiency, to induce the production of a cellulase component that needs to be added to the medium. Conventional, cellulase production of excellent as a component of the induction effect, sophorose has been known.
Is sophorose, β-1 2 molecule of glucose, disaccharides and 2 coupled to the rare, does not exist naturally very few. Therefore, various methods have been proposed to manufacture sophorose respectively.
For example, to Patent Document 1, β - (Aspergillus) derived from the genus Aspergillus alkylchain is applied to glucose, sophorose disclosed a method of producing. Is the non-patent document 1, Listeria, derived from the β-1 (Listeria innocua) innocua, 2-glucose and glucose oligo-glucan phosphorylase-1-is applied to the phosphoric acid, sophorose disclosed a method of producing. Is Patent Document 2, derived from Rhoma Acremonium end of the β-1, 2-β-1 the glucanase, 2-glucan is applied to the, sophorose disclosed a method of producing.
Scope of claims (In Japanese)請求の範囲 [請求項1]
 直鎖β-1,2-グルカンに作用してソホロースを生成するエキソ-β-1,2-グルカナーゼ。

[請求項2]
 以下の酵素学的性質を有する請求項1に記載のエキソ-β-1,2-グルカナーゼ。
(i)基質特異性及び作用特性
 直鎖β-1,2-グルカンにエキソ的に作用してソホロースを生成する。
(ii)至適pH
 30℃の条件下で、pH6.5。
(iii)至適温度
 pH6.5の条件下で、40℃。
(iv)安定pH
 30℃、1時間の条件下で、pH5.5~10で安定。
(v)温度安定性
 pH6.5、1時間の条件下で、30℃まで安定。

[請求項3]
 パラバクテロイデス・ディスタソニス由来である請求項1又は2に記載のエキソ-β-1,2-グルカナーゼ。

[請求項4]
 下記(a)~(d)から選択されるいずれか1種であるエキソ-β-1,2-グルカナーゼ。
(a)配列番号1のアミノ酸配列からなるタンパク質。
(b)配列番号1において1~18番目のアミノ酸残基を欠失したアミノ酸配列からなるタンパク質。
(c)前記(a)又は(b)のアミノ酸配列において1個若しくは数個のアミノ酸残基が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、エキソ-β-1,2-グルカナーゼ活性を有するタンパク質。
(d)前記(a)又は(b)のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有し、かつ、エキソ-β-1,2-グルカナーゼ活性を有するタンパク質。

[請求項5]
 パラバクテロイデス・ディスタソニス由来である請求項4に記載のエキソ-β-1,2-グルカナーゼ。

[請求項6]
 請求項4又は5に記載のエキソ-β-1,2-グルカナーゼをコードするポリヌクレオチド。

[請求項7]
 請求項6に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。

[請求項8]
 請求項7に記載の発現ベクターが導入された形質転換体。

[請求項9]
 請求項8に記載の形質転換体を培養し、培養物から請求項4又は5に記載のエキソ-β-1,2-グルカナーゼを回収する工程を含むエキソ-β-1,2-グルカナーゼの製造方法。

[請求項10]
 エキソ-β-1,2-グルカナーゼを直鎖β-1,2-グルカンに作用させる工程を含むソホロースの製造方法。

[請求項11]
 前記エキソ-β-1,2-グルカナーゼが以下の酵素学的性質を有する請求項10に記載のソホロースの製造方法。
(i)基質特異性及び作用特性
 直鎖β-1,2-グルカンにエキソ的に作用してソホロースを生成する。
(ii)至適pH
 30℃の条件下で、pH6.5。
(iii)至適温度
 pH6.5の条件下で、40℃。
(iv)安定pH
 30℃、1時間の条件下で、pH5.5~10で安定。
(v)温度安定性
 pH6.5、1時間の条件下で、30℃まで安定。

[請求項12]
 前記エキソ-β-1,2-グルカナーゼがパラバクテロイデス・ディスタソニス由来である請求項10又は11に記載のソホロースの製造方法。

[請求項13]
 下記(a)~(d)から選択されるいずれか1種であるエキソ-β-1,2-グルカナーゼを直鎖β-1,2-グルカンに作用させる工程を含むソホロースの製造方法。
(a)配列番号1のアミノ酸配列からなるタンパク質。
(b)配列番号1において1~18番目のアミノ酸残基を欠失したアミノ酸配列からなるタンパク質。
(c)前記(a)又は(b)のアミノ酸配列において1個若しくは数個のアミノ酸残基が置換、欠失、又は付加されたアミノ酸配列からなり、かつ、エキソ-β-1,2-グルカナーゼ活性を有するタンパク質。
(d)前記(a)又は(b)のアミノ酸配列と90%以上の配列同一性を有し、かつ、エキソ-β-1,2-グルカナーゼ活性を有するタンパク質。

[請求項14]
 前記エキソ-β-1,2-グルカナーゼがパラバクテロイデス・ディスタソニス由来である請求項13に記載のソホロースの製造方法。

  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • TOKYO UNIVERSITY OF SCIENCE FOUNDATION
  • NIIGATA UNIVERSITY
  • Inventor
  • NAKAJIMA Masahiro
  • TAGUCHI Hayao
  • SHIMIZU Hisaka
  • NAKAI Hiroyuki
IPC(International Patent Classification)
Specified countries National States: AE AG AL AM AO AT AU AZ BA BB BG BH BN BR BW BY BZ CA CH CL CN CO CR CU CZ DE DJ DK DM DO DZ EC EE EG ES FI GB GD GE GH GM GT HN HR HU ID IL IN IR IS JO JP KE KG KH KN KP KR KW KZ LA LC LK LR LS LU LY MA MD ME MG MK MN MW MX MY MZ NA NG NI NO NZ OM PA PE PG PH PL PT QA RO RS RU RW SA SC SD SE SG SK SL SM ST SV SY TH TJ TM TN TR TT TZ UA UG US UZ VC VN ZA ZM ZW
ARIPO: BW GH GM KE LR LS MW MZ NA RW SD SL SZ TZ UG ZM ZW
EAPO: AM AZ BY KG KZ RU TJ TM
EPO: AL AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR HR HU IE IS IT LT LU LV MC MK MT NL NO PL PT RO RS SE SI SK SM TR
OAPI: BF BJ CF CG CI CM GA GN GQ GW KM ML MR NE SN ST TD TG
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