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TISSUE SLICE SELECTION METHOD, AND EMBEDDED BLOCK PREPARING CASSETTE

Foreign code F190009686
File No. S2017-0517-C0
Posted date Jan 23, 2019
Country WIPO
International application number 2018JP017336
International publication number WO 2018199335
Date of international filing Apr 27, 2018
Date of international publication Nov 1, 2018
Priority data
  • P2017-090793 (Apr 28, 2017) JP
Title TISSUE SLICE SELECTION METHOD, AND EMBEDDED BLOCK PREPARING CASSETTE
Abstract Provided are a tissue slice selection method and an embedded block preparing cassette with which it is possible to suppress the occurrence of errors in inspection results. This tissue slice selection method makes it possible to suppress the occurrence of errors in inspection results by comprising: an embedded block preparing step of preparing an embedded block 24 by embedding a biological tissue piece 22 and a reference material 21 in the same embedding agent 23; an embedded tissue slice preparing step of thinly cutting the embedded block 24 to prepare a sheet-like embedded tissue slice 44 in the surface of which a tissue slice 42 and a reference material slice 41a, 41b, 41c, 41d, 41e appear; and a tissue slice selecting step of selecting the tissue slice 42 to be inspected, on the basis of an optical signal from the reference material slice.
Outline of related art and contending technology BACKGROUND ART
Cancerous tissue in a particular gene is amplified by the product of the gene is overexpressed protein is known.In the inspection of the cancer or the like, of the protein in the biological sample obtained from the over-expression or gene amplification is detected by immunohistochemical staining, the state of each specimen being inspected.
For example, such as breast cancer tumor in a cell, one of the 1 oncogene HER2/neu protein HER2/neu gene product of the gene was overexpressed in a high frequency.Therefore, using immunohistochemical staining HER2/neu protein is detected in the tumor cells, HER2/neu over-expression of the protein to determine whether or not, whether or not suffering from cancer can be inspected.
This principle is applied as the test kit, HER2/neu protein expression in tumor cells has been targeted, HER2/neu protein in the extracellular region of the anti-human monoclonal antibody recognizing HER2/neu gene product (SV2-61γ) (animal species: mouse) immunohistochemical staining using the kit is sold.
Such immunohistochemical staining kit, through the following steps are immunohistochemical staining the specimen (hereinafter, simply referred to as staining.).First, for example collected from the human body to be examined such as liquid paraffin embedded tissue piece of the embedded agent and the embedded block is prepared by preparing step, the embedding block to a desired thickness by a microtome or the like and be sectioned, the sections of the peripheral sections of the tissue surrounded by the embedded agent is embedded tissue sections of a sheet shape made of the number of manufacturing steps, and, in this way the embedded tissue sections were prepared on a glass slide and placed in the mounting step, and staining the sample can be prepared in the form.
Subsequently, on the slide glass to remove paraffin embedded tissue sections of paraffin is removed from the processing step, and, the tissue sections were activation antigen activation treatment step.
Finally, 3V/V % with a hydrogen peroxide solution and the like of the endogenous peroxidase blocking step, a specific antigen in the tissue section on the primary antibody is bound primary antibody reactive processing step, the enzyme labeled secondary antibody coupled to a primary antibody which binds to a secondary antibody reactive processing step, and, a substrate solution containing a chromogenic substrate (for example DAB: 3,3 ' - diaminobenzidine) by using the color of the stained tissue section stained with antigen-specific processing step is performed.Such a series of steps, tissue sections are stained (non-patent document 1).
In this case, staining the slide control for determining whether, in addition to the embedded tissue sections prepared in advance, the control slide stained tissue sections may be at the same time.The control slide, and a sample specimen, staining intensity of the sample and the sample can be determined whether or not a stain from.Control by means of a slide, staining was properly performed is confirmed, based on the predefined criteria is determined that the score of the intensity of the staining of tissue sections, the score from the result of the determination, whether or not the tissue in the lesion tissue sections are carried out (non-patent document 2).
Scope of claims (In Japanese)請求の範囲 [請求項1]
 マーカーを特異的に検出して、検査する組織切片を選定する組織切片選定方法であって、
 生体組織片と標準物質とを共に同じ包埋剤に包埋して包埋ブロックを作製する包埋ブロック作製工程と、
 前記包埋ブロックを薄切して、前記組織切片及び標準物質切片が表面に現れているシート形状の包埋組織切片を作製する包埋組織切片作製工程と、
 前記標準物質切片からの光シグナルに基づいて、検査する前記組織切片を選定する組織切片選定工程と
 を有する組織切片選定方法。

[請求項2]
 前記包埋ブロック作製工程は、
 トレイ底面に前記生体組織片を載置する載置工程と、
 包埋ブロック作製カセットを用意し、前記包埋ブロック作製カセットの位置決め孔に前記標準物質を挿入し、前記トレイ底面を基準としたときの前記生体組織片の下端から上端までの高さ範囲内に前記標準物質が存在するように前記標準物質を位置決めする位置決め工程と、
 液状包埋剤をトレイに流し込む液状包埋剤導入工程と、
 前記液状包埋剤を固化させて、前記生体組織片と前記標準物質とが共に同じ包埋剤に包埋した前記包埋ブロックを作製する固化工程と、
 を有する請求項1に記載の組織切片選定方法。

[請求項3]
 前記標準物質は、前記組織切片の厚さの基準となる厚さ標準物質である
 請求項1又は2に記載の組織切片選定方法。

[請求項4]
 前記標準物質は、マーカーの検出結果の適否の基準となるマーカー標準物質である
 請求項1又は2に記載の組織切片選定方法。

[請求項5]
 前記標準物質は、前記組織切片の厚さの基準となる厚さ標準物質と、マーカーの検出結果の適否の基準となるマーカー標準物質と、であり、
 前記組織切片選定工程は、
 前記厚さ標準物質からの光シグナルに基づいて、検査する前記組織切片を選定する組織切片厚判断工程と、
 前記組織切片厚判断工程の後に、前記マーカー標準物質からの光シグナルに基づいて、検査する前記組織切片を選定するマーカー適否判断工程と、を備える
 請求項1又は2に記載の組織切片選定方法。

[請求項6]
 前記標準物質が内因性タンパク質を発現する細胞である
 請求項1~5のいずれか1項に記載の組織切片選定方法。

[請求項7]
 前記包埋ブロック作製工程では、前記生体組織片を固定液に所定時間浸漬した後、前記包埋ブロックを作製し、
 前記包埋組織切片作製工程以降に、
 前記包埋組織切片に対して染色処理を行い、前記組織切片内の細胞で発現されている内因性タンパク質からの光シグナルに基づいて、前記固定液による前記組織切片の固定状態を判断する固定状態判断工程を有する
 請求項1~6のいずれか1項に記載の組織切片選定方法。

[請求項8]
 生体組織片が包埋された包埋ブロックを作製する包埋ブロック作製カセットであって、
 液状包埋剤を流し込むトレイ上に載置される箱体を備えており、
 前記箱体は、
 トレイ底面上の前記生体組織片と対向した領域に上面と下面とが貫通した貫通孔を備える枠部と、
 前記トレイ底面と向かい合うように設けられ、標準物質が挿入される位置決め孔を有する標準物質位置決め部と
 を備え、
 前記標準物質位置決め部は、前記トレイ底面を基準としたときの前記生体組織片の下端から上端までの高さ範囲内に前記標準物質が存在するように、前記標準物質を位置決めする
 包埋ブロック作製カセット。

[請求項9]
 前記枠部は、前記生体組織片の全体、前記生体組織片の対向する両端部、又は、前記生体組織片の1/3以上が前記貫通孔の形成領域に配置される
 請求項8に記載の包埋ブロック作製カセット。

[請求項10]
 前記標準物質位置決め部は、前記位置決め孔を2つ以上有している
 請求項8又は9に記載の包埋ブロック作製カセット。

[請求項11]
 前記枠部は、板枠部を下面に有し、
 前記標準物質位置決め部が前記板枠部で囲まれた領域内に配置されている
 請求項8~10のいずれか1項に記載の包埋ブロック作製カセット。

[請求項12]
 マーカーを特異的に検出して、検査する組織切片を選定する組織切片選定方法であって、
 生体組織片を固定液に所定時間浸漬した後、前記生体組織片を包埋剤に包埋して包埋ブロックを作製する包埋ブロック作製工程と、
 前記包埋ブロックを薄切して、前記組織切片が表面に現れているシート形状の包埋組織切片を作製する包埋組織切片作製工程と、
 前記包埋組織切片に対して染色処理を行い、前記組織切片内の細胞で発現されている内因性タンパク質からの光シグナルに基づいて、前記固定液による前記組織切片の固定状態を判断する固定状態判断工程と、
 を有する組織切片選定方法。

  • Applicant
  • ※All designated countries except for US in the data before July 2012
  • NIHON UNIVERSITY
  • NICHIREI BIOSCIENCES INC.
  • Inventor
  • MASUDA Shinobu
  • SUZUKI Ryohei
  • KITANO Yuriko
IPC(International Patent Classification)
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