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DIFFERENTIATING AND INDUCING METHOD OF SKELETAL MUSCLE CELL

Patent code P09A014414
File No. 613
Posted date May 8, 2009
Application number P2004-372656
Publication number P2006-174784A
Patent number P4581085
Date of filing Dec 24, 2004
Date of publication of application Jul 6, 2006
Date of registration Sep 10, 2010
Inventor
  • (In Japanese)出澤 真理
  • (In Japanese)鍋島 陽一
  • (In Japanese)星野 幹雄
Applicant
  • (In Japanese)国立大学法人京都大学
Title DIFFERENTIATING AND INDUCING METHOD OF SKELETAL MUSCLE CELL
Abstract PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for efficiently and simply differentiating and inducing a bone marrow stromal cell to a skeletal muscle cell with good reproducibility.
SOLUTION: This method for differentiating and inducing the bone marrow stromal cell to the skeletal muscle cell includes a process (a) for adding one or more substances selected from a group consisting of a cyclic AMP rise acting medicament, a cyclic AMP analog, and a cell differentiation and survival acting factor to a culture of the bone marrow stromal cell (provided that, the bone marrow stromal cell comprises the cell which is not treated with a demethylating agent), so as to culture the cell, a process (b) for introducing a Notch gene and/or a Notch signaling-associated gene into the cell obtained by the process (a) and culturing the cell, so as to obtain a culture of a myoblast (provided that, the culture does not contain a coculture of the cell into which the gene is introduced and the cell into which the gene is not introduced), and a process (c) for adding a Notch ligand to the culture of the myoblast obtained by the process (b) and culturing the myoblast.
Outline of related art and contending technology (In Japanese)


筋疾患、とくに骨格筋の変性疾患である筋ジストロフィーなどに対しては現時点では有効な治療手段がない。患者自身の骨髄間質細胞から骨格筋細胞を作成することができれば自家移植が可能であり、有効な治療方法になるものと考えられる。また、上記の再生医療などの治療面だけではなく、今後開発が予想される人工臓器などの工学的な方面においても患者自身の骨髄間質細胞から生成させた骨格筋細胞の利用が考えられる。培養レベルで筋肉細胞を容易に作成できることから、ハイブリッド型の人工臓器などの作成において使用も考えられる。



骨髄間質細胞から骨格筋を分化誘導させる方法としては、特開2003-144155号公報に記載された方法が知られている。この方法は、(1)骨髄から骨髄間質細胞を単離して培養する工程;(2)脱メチル化剤(5-アザシチジン)を添加する工程;(3)cAMP上昇作用性薬剤又はcAMPアナログ(フォルスコリン)、及び/又は細胞分化生存作用性因子(bFGF、PDGF-AA、ヘレグリン)を添加する工程;(4)細胞にNotch遺伝子及び/又はNotchシグナリング関連遺伝子を導入して培養する工程;(5)遺伝子導入された細胞と未導入細胞とを共培養する工程;及び(6)cAMP上昇作用性薬剤又はcAMPアナログ(フォルスコリン)を添加する工程を必須の工程として含んでいる。



しかしながら、上記の方法は6工程を含むものであり、操作が非常に煩雑であるという問題点を有している。煩雑な操作で多数の工程を行なうと不確定要素が増加し、誘導効率の低下につながる。また、この方法は基本的に神経細胞を分化誘導する方法として提案されており、骨格筋誘導を選択的に分化誘導するために最適化された方法ではない。さらに、この方法では筋細胞以外の要素を含む混合系を用いていることから、誘導された骨格筋細胞を臨床応用する際に安全性の観点で問題を有している。
【特許文献1】
特開2003-144155号公報

Field of industrial application (In Japanese)


本発明は骨髄間質細胞から骨格筋細胞を分化誘導する方法に関するものである。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
骨髄間質細胞から骨格筋細胞を分化誘導する方法であって、以下の工程:
(a)骨髄間質細胞(ただし、該骨髄間質細胞は脱メチル化剤で処理されていない細胞である)の培養物に、フォルスコリン、並びに細胞分化生存作用性因子である塩基性線維芽細胞成長因子、血小板由来成長因子、及びニューレグリンを添加して培養する工程;
(b)上記工程(a)で得られた細胞にNotch細胞内ドメインの遺伝子を導入して培養し筋芽細胞培養物を得る工程(ただし、上記培養は、遺伝子導入された細胞と未導入細胞との共培養を含まない培養である);及び、
(c)上記工程(b)で得られた筋芽細胞培養物にJagged1蛋白を添加して培養する工程
を含む方法。

【請求項2】
 
上記工程(c)を無血清培地で行なう請求項1に記載の方法。

【請求項3】
 
骨髄間質細胞から筋芽細胞を分化誘導する方法であって、以下の工程:
(a)骨髄間質細胞(ただし、該骨髄間質細胞は脱メチル化剤で処理されていない細胞である)の培養物に、フォルスコリン、並びに細胞分化生存作用性因子である塩基性線維芽細胞成長因子、血小板由来成長因子、及びニューレグリンを添加して培養する工程;及び
(b)上記工程(a)で得られた細胞にNotch細胞内ドメインの遺伝子を導入して培養し筋芽細胞培養物を得る工程(ただし、上記培養は、遺伝子導入された細胞と未導入細胞との共培養を含まない培養である)
を含む方法。
IPC(International Patent Classification)
F-term
State of application right Registered
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