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GENE-SILENCING INHIBITION TECHNOLOGY

Patent code P09A014520
File No. 331-701
Posted date May 22, 2009
Application number P2007-065920
Publication number P2008-220313A
Patent number P5266489
Date of filing Mar 14, 2007
Date of publication of application Sep 25, 2008
Date of registration May 17, 2013
Inventor
  • (In Japanese)西口 正通
  • (In Japanese)チェン フイ
  • (In Japanese)山岡 直人
Applicant
  • (In Japanese)国立大学法人愛媛大学
Title GENE-SILENCING INHIBITION TECHNOLOGY
Abstract PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for constructing an expression vector in a good efficiency by shortening a gene region encoding a gene-silencing inhibitory protein.
SOLUTION: (a) This nucleic acid sequence encoding a water melon green spot mosaic virus 129K protein or the fragment of a nucleic acid sequence encoding a corresponding protein to the above and containing at least a specific sequence, (b) the nucleic acid sequence containing one or several substitutions, additions or deletions to the sequence (a), or (c) a nucleic acid containing a nucleic acid sequence hybridizing with the nucleic acid having the sequence (a) under a stringent condition and encoding a product having a function of inhibiting the gene-silencing on its expression are provided.
Outline of related art and contending technology (In Japanese)


外来遺伝子を真核生物へ導入することにより、有用タンパク質や物質を大量に得る技術において、RNAサイレンシングが起こり障害となっている。このため、遺伝子導入した生物においてサイレンシングが起きた場合、サイレンシング抑制タンパク質を用いることがあり、現在でも、一部利用されている(非特許文献1および非特許文献2)。



従来、サイレンシング抑制の技術では、完全長のタンパク質を用いており、短い部分だけを用いるということはなかった。例えば、完全長のサイレンシング抑制タンパク質として、タバモウイルスに属するトマトモザイクウイルス(ToMV)およびタバコモザイクウイルス(TMV)が使用されてきた(非特許文献3および非特許文献4)。



しかし、完全長のタンパク質をサイレンシング抑制技術に用いると、コードする遺伝子領域が長くなるので、発現ベクターの構築に時間を要するという問題があった。
【非特許文献1】
竹田篤史、三瀬和之、奧野哲郎「植物ウイルスとRNAi」、化学と生物.43(7);468-475,2005
【非特許文献2】
Voinnet O,Rivas S,Mestre P,Baulcombe D.「An enhanced transient expression system in plants based on suppression of gene silencing by the p19 protein of tomato bushy stunt virus」、Plant J.2003 Mar;33(5):949-56
【非特許文献3】
Kubota et al.「Tomato mosaic virus replication protein suppresses virus-targeted posttranscriptional gene silencing」、Journal of Virology 2003 Oct;77(20):11016-26
【非特許文献4】
Ding et al.「The Tobacco mosaic virus 126-kDa Protein Associated with Virus Replication and Movement Suppresses RNA Silencing」、MPMI Vol.17、No.6,2004、583-592

Field of industrial application (In Japanese)


本発明は、ジーンサイレンシング(特に、植物のジーンサイレンシング)の技術に関する。詳細には、本発明は、ジーンサイレンシングを抑制する技術に関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
イカ緑斑モザイクウイルス129Kタンパク質をコードする配列番号1に示す核酸配列またはそのフラグメントであって、該フラグメントは少なくとも配列番号3に示す配列またはそれに対応する配列を含む、核酸配列またはフラグメント
を含む、ジーンサイレンシングを抑制するための組成物

【請求項2】
 
前記核酸配列またはフラグメントは、配列番号3に示す核酸配列からなる、請求項1に記載の組成物

【請求項3】
 
前記核酸配列またはフラグメントは、列番号1の全長よりも短い、請求項1に記載の組成物

【請求項4】
 
さらに、プロモーター配列を含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の組成物

【請求項5】
 
前記プロモーター配列は、35Sプロモーター、ユビキチンのプロモーターからなる群より選択されるプロモーターに由来する、請求項4に記載の組成物

【請求項6】
 
さらに、ターミネーター配列を含む、請求項1~5のいずれか1項に記載の組成物

【請求項7】
 
前記ターミネーター配列は、Nosターミネーター、35Sのターミネーターからなる群より選択されるターミネーターに由来する、請求項6に記載の組成物

【請求項8】
 
35Sプロモーター配列およびNosターミネーター配列をさらに含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の組成物

【請求項9】
 
スイカ緑斑モザイクウイルス129Kタンパク質をコードする配列番号1に示す核酸配列またはそのフラグメントであって、該フラグメントは少なくとも配列番号3に示す配列またはそれに対応する配列を含む、核酸配列またはフラグメントを含む、ジーンサイレンシングを抑制するためのベクター。

【請求項10】
 
プロモーター配列をさらに含む、請求項9に記載のベクター。

【請求項11】
 
ターミネーター配列をさらに含む、請求項9または10に記載のベクター。

【請求項12】
 
遺伝子導入を行なって生じたジーンサイレンシングを抑制する方法であって、該方法は、以下:
a)請求項1~8のいずれか1項に記載の組成物または請求項9~11のいずれか1項に記載のベクターを提供する工程;および
b)該組成物またはベクターを用いて該ジーンサイレンシングが起こった植物を形質転換する工程
を包含する、方法。

【請求項13】
 
遺伝子導入を行なって生じたジーンサイレンシングを抑制するためのキットであって、該キットは、
請求項1~8のいずれか1項に記載の組成物または請求項9~11のいずれか1項に記載のベクター
組成物またはベクターを、該ジーンサイレンシングが起こった植物に導入するための手段、
を備える、キット。

【請求項14】
 
植物において外来遺伝子のポリペプチドを生産する方法であって、該生産時に該物においてジーンサイレンシングが生じ、該方法は、
a)該外来遺伝子をコードする核酸分子を該物に導入する工程;
b)請求項1~8のいずれか1項に記載の組成物または請求項9~11のいずれか1項に記載のベクターを提供する工程;
c)該組成物またはベクターを用いて該物を形質転換する工程;および
d)該物を該ポリペプチドが発現する条件下におく工程、
を包含する、方法。
IPC(International Patent Classification)
F-term
Drawing

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State of application right Registered
Shikoku TLO is introducing the seeds of 4 inside 20 university and a technical college. Please ask to the following about the detailed contents of seeds. I am waiting for an inquiry.


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