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NEW HUMAN LYMPHOCYTE, PRODUCTION METHOD THEREOF AND METHOD FOR PROLIFERATING γδT CELL commons

Patent code P110002443
File No. 10-01
Posted date Apr 20, 2011
Application number P2010-125140
Publication number P2011-250711A
Patent number P4748491
Date of filing May 31, 2010
Date of publication of application Dec 15, 2011
Date of registration May 27, 2011
Inventor
  • (In Japanese)岡村 春樹
  • (In Japanese)李 文
  • (In Japanese)山西 博道
Applicant
  • (In Japanese)学校法人兵庫医科大学
  • (In Japanese)山西 博道
Title NEW HUMAN LYMPHOCYTE, PRODUCTION METHOD THEREOF AND METHOD FOR PROLIFERATING γδT CELL commons
Abstract PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a human lymphocyte which has a strong cytokine-producing ability and cytotoxic activity and can promote the proliferation of γδT cells, to provide a production method thereof, and to provide a method for proliferating the γδT cells with the human lymphocyte.
SOLUTION: In the human lymphocyte stimulated with at least interleukin 2 and interleukin 18, expression intensity of CD56 is ≥102, and the expression intensity of CD11c is 101 to 102, wherein the expression intensity is measured by flow cytometry.
Outline of related art and contending technology (In Japanese)


γδT細胞は、メモリータイプのリンパ球であり、感染や腫瘍に対する生体防御において重要な役割を担っている。ヒト末梢血中では、その数は少なく、通常の末梢Tリンパ球のうち1~5%を占めるに過ぎない。γδT細胞の大部分はVγ9Vδ2型で、ペプチドよりもリン酸抗原などに強く反応して活性化され、増殖する。



ヒト末梢血リンパ球からγδT細胞を増殖させるには、インターロイキン2(IL-2。以下、インターロイキンを「IL」と称する)の存在下でビスホスホネートや、イソペンテニルピロリン酸(IPP)誘導体でヒト末梢血リンパ球を刺激するという方法が用いられる。このようにして活性化され、増殖したγδT細胞は、強い抗腫瘍活性をもつことから、癌治療への応用が試みられており、実際、肺転移した癌に対して用いたところ、完全寛解したという報告もある(非特許文献1)。一方、本発明者は、ゾレドロネート、IL-2およびIL-18を用いてVγ9Vδ2T細胞を刺激すると、その増殖が著しく高められることを見出している(特許文献1)。

Field of industrial application (In Japanese)


本発明は新規ヒトリンパ球およびその製造方法並びにγδT細胞の増殖方法に関する。特に、特定の表面抗原を備え、強いサイトカイン産生能および細胞障害活性を有するとともに、γδT細胞の増殖に関与する能力を持つヒトリンパ球およびその製造方法並びに上記ヒトリンパ球を用いたγδT細胞の増殖方法に関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
CD3の発現強度が100以上102.3以下であり、かつ、CD11cの発現強度が101以上102以下であるヒトPBMCsを、インターロイキン2およびインターロイキン18を含む培地中で培養してなる細胞群に含有されるヒトリンパ球であって、
CD56の発現強度が102以上、かつ、CD11cの発現強度が101以上102以下であり、
上記CD3、CD11cおよびCD56の発現強度は、CD3、CD11cおよびCD56のそれぞれに対する、FITC、PE、APCおよびビオチンによって標識した抗体によって、ヒトリンパ球を4℃で20分間染色し、フローサイトメーターを用いて解析したものであることを特徴とするヒトリンパ球。

【請求項2】
 
上記ヒトリンパ球の80%以上は、CD25の発現強度が102以上であり、CD25の発現強度は、CD25に対する、FITC、PE、APCおよびビオチンによって標識した抗体によって、上記ヒトリンパ球を4℃で20分間染色し、フローサイトメーターを用いて解析したものであることを特徴とする請求項1に記載のヒトリンパ球。

【請求項3】
 
上記ヒトリンパ球の80%以上は、HLA-DRの発現強度が102以上であり、HLA-DRの発現強度は、HLA-DRに対する、FITC、PE、APCおよびビオチンによって標識した抗体によって、上記ヒトリンパ球を4℃で20分間染色し、フローサイトメーターを用いて解析したものであることを特徴とする請求項1または2に記載のヒトリンパ球。

【請求項4】
 
上記ヒトリンパ球の80%以上は、CD86の発現強度が102以上であり、CD86の発現強度は、CD86に対する、FITC、PE、APCおよびビオチンによって標識した抗体によって、上記ヒトリンパ球を4℃で20分間染色し、フローサイトメーターを用いて解析したものであることを特徴とする請求項1から3のいずれか1項に記載のヒトリンパ球。

【請求項5】
 
上記ヒトリンパ球は、CD122を発現しているヒトリンパ球の数が、全細胞数の10%未満であることを特徴とする請求項1から4のいずれか1項に記載のヒトリンパ球。

【請求項6】
 
請求項1から5のいずれか1項に記載のヒトリンパ球を製造する方法であって、
CD3の発現強度が100以上102.3以下であり、かつ、CD11cの発現強度が101以上102以下であるヒトPBMCsを、インターロイキン2およびインターロイキン18を含む培地中で培養する工程を含み、
上記CD3およびCD11cの発現強度は、CD3およびCD11cのそれぞれに対する、FITC、PE、APCおよびビオチンによって標識した抗体によって、上記ヒトリンパ球を4℃で20分間染色し、フローサイトメーターを用いて解析したものであることを特徴とする方法。

【請求項7】
 
請求項1から5のいずれか1項に記載のヒトリンパ球と、γδT細胞とを、インターロイキン2、インターロイキン18およびリン酸化合物を用いて刺激する工程を含むことを特徴とする、γδT細胞の増殖方法。

【請求項8】
 
上記ヒトリンパ球がケモカインを分泌しており、γδT細胞がケモカインレセプターを発現していることを特徴とする、請求項7に記載のγδT細胞の増殖方法。

【請求項9】
 
上記リン酸化合物は、ゾレドロネートであることを特徴とする、請求項7または8に記載のγδT細胞の増殖方法。
IPC(International Patent Classification)
F-term
Drawing

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JP2010125140thum.jpg
State of application right Registered


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