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METHOD FOR JUDGING PHYSIOLOGICAL ACTIVITY AND KIT FOR JUDGING PHYSIOLOGICAL ACTIVITY commons

Patent code P110005289
Posted date Aug 18, 2011
Application number P2005-294550
Publication number P2007-097532A
Patent number P4830103
Date of filing Oct 7, 2005
Date of publication of application Apr 19, 2007
Date of registration Sep 30, 2011
Inventor
  • (In Japanese)金原 和秀
  • (In Japanese)下村 有美
Applicant
  • (In Japanese)国立大学法人 岡山大学
Title METHOD FOR JUDGING PHYSIOLOGICAL ACTIVITY AND KIT FOR JUDGING PHYSIOLOGICAL ACTIVITY commons
Abstract PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for judging a physiological activity capable of judging the physiological activity of microorganisms by staining the group of the microorganisms forming a colony form, while maintaining their colony form and making them alive, and a kit for judging the physiological activity.
SOLUTION: This method for judging the physiological activity is provided by collecting the microorganisms on a filter membrane, culturing and then staining the microorganisms on the filter membrane by fluorescent dyeing liquid penetrated from the lower surface side of the filter membrane. In the fluorescent dyeing liquid, a live cell-dyeing fluorescent dyestuff and a dead cell-dyeing fluorescent dyestuff having a different fluorescent wave length than that of the live cell-dyeing fluorescent dyestuff are incorporated.
Outline of related art and contending technology (In Japanese)


蛍光標識を用いて細胞の生理活性を測定する方法は、動物細胞では様々なシステムが開発されている。例えば、アポトーシスや細胞周期などの測定は、測定用システムが市販されている。
一方微生物については、火炎固定やアルコール固定等により固定化してから、コロニー中の特定のDNA若しくはRNAを蛍光で検出するFISH法などによる観察が行われている。この場合、固定化により、コロニー中の微生物は総て死滅するので、微生物の生理活性は、特定遺伝子の発現状況等から、間接的に判定することになる。
これに対して、生細胞染色用蛍光染料と、該生細胞染色用蛍光染料と蛍光波長の異なる死細胞染色用蛍光染料とを含有する蛍光染色液で微生物を染色して、生菌数と死菌数とを個別に計数する技術が開発されている(特許文献1、2)。
また、微生物を濾過膜上に捕集して培養した後に、微生物を固定化しない状態で蛍光染料を上から滴下することにより染色して、コロニー数を計測する技術が開発されている(特許文献3)。
【特許文献1】
特開2000-232897号公報
【特許文献2】
特開2003-284592号公報
【特許文献3】
特開平9-37794号公報

Field of industrial application (In Japanese)


本発明は、微生物の生理活性判定方法、及び生理活性判定用キットに関する。更に詳しくは、微生物のコロニー形成過程における生理活性の判定に好適な微生物の生理活性判定方法、及び生理活性判定用キットに関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
微生物を濾過膜上に捕集して培養した後、該濾過膜の下面側から浸透させた蛍光染色液で前記濾過膜上の微生物を染色することを特徴とする微生物の生理活性判定方法。

【請求項2】
 
微生物を濾過膜上に捕集し、該捕集後の濾過膜を培地の上に置いて前記濾過膜上に捕集した微生物を培養した後、蛍光染色液の液滴上に該培養後の濾過膜を置くことにより、該濾過膜の下面側から浸透させた蛍光染色液で前記濾過膜上の微生物を染色することを特徴とする微生物の生理活性判定方法。

【請求項3】
 
前記培養を特定化合物の存在下で行い、該特定化合物の影響を評価する請求項1または2に記載の生理活性判定方法。

【請求項4】
 
前記蛍光染色液が、生細胞染色用蛍光染料と、該生細胞染色用蛍光染料と蛍光波長の異なる死細胞染色用蛍光染料とを含有する請求項1から3のいずれか一項に記載の生理活性判定方法。

【請求項5】
 
微生物を染色した後の前記濾過膜を風乾後、該濾過膜に浸漬油を浸透させ、その後該浸漬油を除去する請求項1から4の何れか一項に記載の生理活性判定方法。

【請求項6】
 
微生物を染色した後の前記濾過膜上に励起光を照射し、蛍光顕微鏡で蛍光画像を観察する請求項1から5の何れか一項に記載の生理活性判定方法。

【請求項7】
 
微生物を染色した後の前記濾過膜上に励起光を照射し、得られる蛍光強度を測定する請求項1から6の何れか一項に記載の生理活性判定方法。

【請求項8】
 
請求項1から7の何れか一項に記載の生理活性判定方法を行うための生理活性判定用キットであって、濾過膜と、生細胞染色用蛍光染料と、該生細胞染色用蛍光染料と蛍光波長の異なる死細胞染色用蛍光染料とを備えることを特徴とする生理活性判定用キット。
IPC(International Patent Classification)
F-term
Drawing

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JP2005294550thum.jpg
State of application right Registered
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