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METHOD OF DECOMPOSING PROTEIN

Patent code P120007134
File No. 620
Posted date Mar 30, 2012
Application number P2009-136769
Publication number P2010-279313A
Patent number P5675063
Date of filing Jun 8, 2009
Date of publication of application Dec 16, 2010
Date of registration Jan 9, 2015
Inventor
  • (In Japanese)赤坂 一之
Applicant
  • (In Japanese)京都府公立大学法人
Title METHOD OF DECOMPOSING PROTEIN
Abstract PROBLEM TO BE SOLVED: To effectively decompose proteins or protein aggregates hardly undergoing proteolysis to peptides or amino acids by a protease under a normal condition.
SOLUTION: In a method of decomposing protein, hardly decomposable proteins or protein aggregates which do not undergo proteolysis by a conventional enzyme are placed under pressure in the presence of the enzyme. The three-dimensional structure of the proteins or protein aggregates is changed under pressure to a structure easily undergoing proteolysis by the enzyme. The proteins whose three-dimensional structure has been changed are decomposed by the enzyme.
Outline of related art and contending technology (In Japanese)

酵素によるプロテオリシスが、加圧により促進される例は知られている(例えば、非特許文献1参照)。非特許文献1では、反応速度論による見かけの活性化体積が負になることから、反応の促進は、圧力による酵素自身の活性の増大によるものであると分析された。

一方、蛋白質には、通常の蛋白質分解酵素によるプロテオリシスが困難な蛋白質または蛋白質集合体が存在することが知られている。これらの蛋白質または蛋白質集合体では、ポリペプチド鎖は折れたたまれて堅固な構造をとるため、そのままでは蛋白質分解酵素の触媒部位に結合できないか、たとえ結合しても分解されない。そのため、通常の条件下では蛋白質分解酵素によるプロテオリシスが困難となる。

また、蛋白質集合体の中でも多くの神経変性疾患やアミロイド疾患では、その病態から、配座異性化した蛋白質分子の線維状集合体の蓄積が病因と関わっていると考えられている。これらの線維状集合体は、通常の蛋白質分解酵素によるプロテオリシスが極めて困難である。

したがって、通常の条件下で蛋白質分解酵素によるプロテオリシスが困難であるこれらの蛋白質または蛋白質集合体を効果的に分解することが重要となる。
【非特許文献1】
Morild,E.,「The theory of pressure effects on enzyme」, Adv.Prot. Chem., 34巻、pp93-166、(1981)

Field of industrial application (In Japanese)

本発明は、常圧下においてプロテオリシス抵抗性の蛋白質または蛋白質集合体を分解する、蛋白質の分解方法に関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
常圧下においてプロテオリシス抵抗性の蛋白質または蛋白質集合体の加圧下での分解方法であって、
(a)対象とする蛋白質または蛋白質集合体の折りたたみ配座異性体が無秩序配座異性体に変わるときの体積変化ΔVを取得または決定する工程
b)対象とする蛋白質または蛋白質集合体と分解酵素とを緩衝液に溶解または分散させる工程、ならびに
c)(b)で得られた溶解液または分散液を前記ΔVに応じた力下で処理し、対象とする蛋白質の折りたたみ配座異性体の構造を変化させることにより、および/または蛋白質集合体を蛋白質単体に解離させた上で配座異性体の構造を変化させることにより、対象とする蛋白質または蛋白質集合体を前記分解酵素により分解する工程
を含む分解方法。

【請求項2】
 
ΔVの決定を高圧NMRまたは高圧蛍光法により行う請求項1記載の分解方法。

【請求項3】
 
前記プロテオリシス抵抗性の蛋白質または蛋白質集合体が蛋白質集合体であり、該蛋白質集合体が同一または異なる蛋白質単体が会合した集合体である請求項1または2記載の分解方法。
IPC(International Patent Classification)
F-term
State of application right Registered


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