TOP > 国内特許検索 > 組み換えヒト膵臓リパーゼの調製方法
ヒト膵リパーゼ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．３．）は、膵腺房細胞で合成され膵液中に分泌される分子量約４万８千の糖タンパク質である。膵リパーゼはトリグリセリドのα位脂肪酸エステルを加水分解し、ジグリセリド成分と遊離の脂肪酸へ分解する。
ヒト膵リパーゼの大量発現法としては、昆虫細胞ｓｆ６を用いて発現させる方法（例えば、非特許文献１参照）、チャイニーズハムスター由来細胞Ｖ７９を用いて発現させる方法（例えば、非特許文献２参照）、酵母を用いて発現させる方法（例えば、非特許文献３参照）が知られている。しかし、これらの方法はいずれもコストが非常にかかる上、発現に６～１０日間を要する。また、いずれの方法においても、リパーゼにヒト型ではない糖鎖が修飾される場合があるため、ヒトがこれらリパーゼを摂取するとアレルギーが引き起こされたり、生体内での安定性が変わる可能性があり、安全性に乏しいと言える。このため、より短期間で発現でき、かつ糖鎖の修飾が起こらない、大腸菌を用いた大量発現方法の開発が求められている。
他方、大腸菌を用いてリパーゼを発現させる方法としては、ジオバチルス属の耐熱性Ｔ１リパーゼをＧＳＴタグを組み込んだ融合タンパクとして発現させる方法（例えば、特許文献１参照）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）の成熟リパーゼ（ＳＡＬ３）を、Ｎ末端側にＨｉｓ６タグを組み込んだ融合タンパクとして発現させる方法（例えば、非特許文献４参照）、Candida antarctica由来のリパーゼを、Ｎ末端側にＦＬＡＧタグ、あるいはＣ末端側にＨｉｓ６タグを組み込んだ融合タンパクとしてそれぞれ発現させる方法（例えば、非特許文献５参照）、Ralstonia sp.M1由来のリパーゼを、Ｈｉｓ６タグを組み込んだ融合タンパクとして発現させる方法（例えば、非特許文献６参照）が知られている。また、デンプン結合性タンパク質（ＳＢＰ）タグを使用する、大腸菌で発現した組換えリパーゼの精製方法（例えば、特許文献２参照）も知られている。これらタグ付きリパーゼにはいずれも酵素活性がみられているが、大量発現系の確立には至っておらず、また、微生物由来のリパーゼとは構造の異なるヒト型リパーゼを大腸菌で発現させる方法については一切考慮されていない。
本発明は、組換えヒト膵臓リパーゼ（ｒｅｃＨＰＬ）の調製方法、より詳しくは、Ｃ末側にＳｔｒｅｐ－ｔａｇIIを付加して精製したＨＰＬを、段階透析法を利用してリフォールディングするｒｅｃＨＰＬの調製方法に関する。
