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MULTIWELL ANALYSIS METHOD AND STIMULATION MULTIWELL CHAMBER CHIP

Patent code P140011138
File No. 13016
Posted date Dec 4, 2014
Application number P2013-159020
Publication number P2015-031520A
Patent number P6170367
Date of filing Jul 31, 2013
Date of publication of application Feb 16, 2015
Date of registration Jul 7, 2017
Inventor
  • (In Japanese)秀 道広
  • (In Japanese)柳瀬 雄輝
  • (In Japanese)石井 香
  • (In Japanese)川口 智子
Applicant
  • Hiroshima University
Title MULTIWELL ANALYSIS METHOD AND STIMULATION MULTIWELL CHAMBER CHIP
Abstract PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a multiwell analysis method and a stimulation multiwell chamber chip capable of efficiently analyzing a stimulation response caused by combination of many kinds of specimens or stimulants at the same time while micronizing the input quantities and simplifying the input procedure for the stimulants.
SOLUTION: A multiwell analysis method first opposes a specimen multiwell chip 1 having two or more specimen input sections and a stimulation multiwell chamber chip 5 having two or more stimulant input sections such that respective sections face to each other in association. The multiwell analysis method next brings the chips closer to each other with a predetermined space interposed therebetween such that columns 11 of mixture of the specimen and the stimulant are formed in a separated state. The multiwell analysis method then evaluates the fluidity of the mixture columns 11 and analyzes the reaction between the specimen and the stimulant in association. At this time, the combination of the specimen and the stimulant in any one mixture column 11 is different from the combination of the specimen and the stimulant in any one of the other mixture columns 11.
Outline of related art and contending technology (In Japanese)

近年、ハイスループットスクリーニングに繋げるため、多種類の測定対象(検体)に対して個別に多種類の薬剤等(反応刺激液)を加え、それぞれの反応刺激応答を同時に解析する方法が研究されている。同時刺激応答解析には、疎水性の側壁または疎水膜等を用いて隔離された検体をウェル区画毎に配置するマルチウェル(マルチウェルチップ)が使用されることがある。

マルチウェル(マルチウェルチップ)において検体が投入された個々の区画には、刺激応答解析の対象の反応刺激液が加えられる。その方法としては、例えば、使用者自身の手でピペットもしくは注入器等を用い、1区画ずつ反応刺激液を滴下する方法、または、予め異なる反応刺激液を各区画に投入しておいた投与用マルチウェルチャンバ(チャンバ装置)を利用し、対応するマルチウェル(マルチウェルチップ)の各区画に反応刺激液を上から(滴下)投与する方法が挙げられる。

一方、このような同時刺激応答によるハイスループットスクリーニングのために、表面プラズモン共鳴(SPR(surface plasmon resonance))現象も利用されている。表面プラズモン共鳴とは、全反射条件で光が金属薄膜に入射するときに発生するエバネッセント光と、金属薄膜と測定対象との境界面を伝搬している自由電子の粗密波である表面プラズモンとが共鳴する現象である。表面プラズモン共鳴が発生すると、入射した光のエネルギーの少なくとも一部が表面プラズモン共鳴に移行し全反射した光の強度が低下する。光の強度が最も低下する入射角を共鳴角という。この共鳴角は、測定対象の誘電率の変化に応じて変化する。実際の研究および検査等では、このような共鳴角変化をリアルタイムでとらえ、様々な解析に利用する表面プラズモン共鳴装置を用いて実験が行われている。

表面プラズモン共鳴現象を用いて測定される対象物には細胞も含まれており、例えば、特許文献1および特許文献2には、表面プラズモン共鳴装置を用いた生細胞の外部刺激に対する活性を評価する方法に関する事項が記載されている。特に、特許文献2には、個々の、またはより細部における生細胞の外部刺激に対する活性を、リアルタイムかつ高感度に分析することができる細胞活性分析装置等について記載されている。当該外部刺激については、生細胞表面の受容体に対するリガンド、温度もしくはpH等の環境変化、または、機械的もしくは電気的刺激等が挙げられている。

Field of industrial application (In Japanese)

本発明は、マルチウェルバイセンシングのための多チャンネル同時刺激応答に関連する、マルチウェル解析方法および刺激用マルチウェルチャンバチップに関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
それぞれの区画が隔離されている少なくとも2つ以上の検体投入区画を有する検体用マルチウェルチップと、それぞれの区画が隔離されている少なくとも2つ以上の刺激物投入区画を有する刺激用マルチウェルチャンバチップについて、前記検体投入区画と前記刺激物投入区画とが対応するよう対向させる工程と、
対応させた前記検体投入区画の投入検体と前記刺激物投入区画の投入刺激物との混合液柱が隔離された状態として形成されるよう、前記検体用マルチウェルチップと前記刺激用マルチウェルチャンバチップとを所定の間隔を置いて近づける工程と、
前記混合液柱の液性を、表面プラズモン共鳴現象分析による解析を適用することによって評価することにより、対応させた前記検体投入区画における前記投入検体と前記刺激物投入区画における前記投入刺激物との反応を解析する工程と、を含み、
いずれか1つの前記混合液柱における前記投入検体と前記投入刺激物との組み合わせは、他のいずれか1つの前記混合液柱における前記投入検体と前記投入刺激物との組み合わせと異なっており、
前記検体用マルチウェルチップは、前記少なくとも2つ以上の検体投入区画において接している金属薄膜を備えていることを特徴とする、マルチウェル解析方法。

【請求項2】
 
前記少なくとも2つ以上の検体投入区画または前記少なくとも2つ以上の刺激物投入区画には、0.1μlから10μlの量の前記投入検体または前記投入刺激物が投入されることを特徴とする、請求項1に記載のマルチウェル解析方法。

【請求項3】
 
前記少なくとも2つ以上の検体投入区画または前記少なくとも2つ以上の刺激物投入区画には、0.1μlから5μlの量の前記投入検体または前記投入刺激物が投入されることを特徴とする、請求項1に記載のマルチウェル解析方法。

【請求項4】
 
前記少なくとも2つ以上の検体投入区画および/または前記少なくとも2つ以上の刺激物投入区画は、疎水膜によりそれぞれの区画が隔離されていることを特徴とする、請求項1から3のいずれか1項に記載のマルチウェル解析方法。

【請求項5】
 
マルチウェル解析方法は、I型アレルギー診断解析方法であり、
前記投入刺激物は、抗原標準物質を含有していることを特徴とする、請求項1から4のいずれか1項に記載のマルチウェル解析方法。

【請求項6】
 
前記抗原標準物質は、花粉、ハウスダスト、動物上皮、植物、ダニ、食物および汗からなる群から選択される1つ以上のものであることを特徴とする、請求項5に記載のマルチウェル解析方法。

【請求項7】
 
さらに、前記混合液柱と他の混合液柱との間隙に流動パラフィンを流し込む工程を含むことを特徴とする、請求項1から6のいずれか1項に記載のマルチウェル解析方法。

【請求項8】
 
前記少なくとも2つ以上の検体投入区画には1種類の前記投入検体が投入され、
前記少なくとも2つ以上の刺激物投入区画にはそれぞれ異なる前記投入刺激物が投入されることを特徴とする、請求項1から7のいずれか1項に記載のマルチウェル解析方法。

【請求項9】
 
前記少なくとも2つ以上の検体投入区画にはそれぞれ異なる前記投入検体が投入され、
前記少なくとも2つ以上の刺激物投入区画には1種類の前記投入刺激物が投入されることを特徴とする、請求項1から7のいずれか1項に記載のマルチウェル解析方法。
IPC(International Patent Classification)
F-term
Drawing

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JP2013159020thum.jpg
State of application right Registered


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