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(In Japanese)植物体の種子における目的タンパク質の発現

Patent code P170013774
File No. (S2013-0388-N0)
Posted date Mar 15, 2017
Application number P2015-511174
Patent number P6562463
Date of filing Mar 19, 2014
Date of registration Aug 2, 2019
International application number JP2014057567
International publication number WO2014167968
Date of international filing Mar 19, 2014
Date of international publication Oct 16, 2014
Priority data
  • P2013-082247 (Apr 10, 2013) JP
Inventor
  • (In Japanese)金井 雅武
  • (In Japanese)西村 幹夫
  • (In Japanese)山田 健志
Applicant
  • (In Japanese)大学共同利用機関法人自然科学研究機構
Title (In Japanese)植物体の種子における目的タンパク質の発現
Abstract (In Japanese)植物体の種子における目的タンパク質の増大に寄与するDNA材料を新たに見出したので、これらの利用を開示する。この目的のために、本開示では、植物体の種子において目的タンパク質の発現を促進する、下記(a)~(d)のいずれかに記載のDNAを植物体に導入する。
(a)配列番号1、2、3又は4で表される塩基配列を有するDNA;
(b)配列番号1、2、3又は4で表される塩基配列と相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNA;
(c)配列番号1、2、3又は4で表される塩基配列と90%以上の同一性の塩基配列を有するDNA;及び
(d)配列番号1、2、3又は4で表される塩基配列において1又は複数個の塩基の置換、欠失、挿入又は付加を有する塩基配列からなるDNA
Outline of related art and contending technology (In Japanese)

植物体を利用してタンパク質を生産することは多くの利点がある。動物トランスジェニックによる場合に比較したコストの低減、生産規模調節の容易性、動物由来の病原体の混入の回避等が挙げられる。

植物体の種子においてタンパク質の発現を促進させる技術については種々試みられている。例えば、所望のタンパク質と窒素トランスポーターの同時発現や種子特異的なプロモーターの利用が報告されている(特許文献1、2)。

Field of industrial application (In Japanese)

本明細書は、植物体の種子において目的タンパク質の発現や蓄積を促進させることができるDNA材料及びその利用に関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
下記(a)から(d)
(a)配列番号1で表される塩基配列を有するDNA;
(b)配列番号1で表される塩基配列と相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNA;
(c)配列番号1で表される塩基配列と90%以上の同一性の塩基配列を有するDNA;及び
(d)配列番号1で表される塩基配列において1又は複数個の塩基の置換、欠失、挿入又は付加を有する塩基配列からなるDNA
のいずれかに記載の第1の3’DNAと、
前記第1の3’DNAの3’末端に連結される前記植物体で作動可能なターミネーター領域を有する第2のDNAと、
を含む、植物体の種子において目的タンパク質の発現を促進するための目的タンパク質発現促進剤。

【請求項2】
 
前記ターミネーター領域は、Nosターミネーターである、請求項1に記載の目的タンパク質発現促進剤。

【請求項3】
 
請求項1又は2に記載の前記第1の3’DNA及び前記第2の3’DNAを含む、発現カセット。

【請求項4】
 
前記第1の3’DNAの上流側に目的タンパク質をコードするDNAの挿入部位を備える、請求項3に記載の発現カセット。

【請求項5】
 
さらに、以下のいずれかに記載の第3のDNAを含む、請求項3又は4に記載の発現カセット。
(a)配列番号5、6、7又は8で表される塩基配列を有するDNA;
(b)配列番号5、6、7又は8で表される塩基配列と相補的な塩基配列からなるDNAとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするDNA;
(c)配列番号5、6、7又は8で表される塩基配列と90%以上の同一性の塩基配列を有するDNA;及び
(d)配列番号5、6、7又は8で表される塩基配列において1又は複数個の塩基の置換、欠失、挿入又は付加を有する塩基配列からなるDNA

【請求項6】
 
請求項3~5のいずれかに記載の発現カセットを備えるベクター。

【請求項7】
 
請求項1又は2に記載のタンパク質発現促進剤を、外来性の目的タンパク質をコードするDNAの下流に保持する形質転換植物細胞。

【請求項8】
 
前記種子における1種又は2種以上の内在性タンパク質の発現が抑制されている、請求項7に記載の形質転換細胞。

【請求項9】
 
前記内在性タンパク質は、12S1グロブリン遺伝子及び12S4グロブリン遺伝子からなる群から選択される1種又は2種である、請求項8に記載の形質転換細胞。

【請求項10】
 
請求項7~9のいずれかに記載の形質転換細胞を含む形質転換植物体。

【請求項11】
 
前記外来性の目的タンパク質発現増大機能が付与された請求項10に記載の形質転換植物体。

【請求項12】
 
請求項10又は11に記載の形質転換植物体の子孫またはクローンである、形質転換植物体。

【請求項13】
 
シロイヌナズナである、請求項10~12のいずれかに記載の形質転換植物体。

【請求項14】
 
請求項10~13のいずれかに記載の形質転換植物体の繁殖材料。

【請求項15】
 
請求項10~13のいずれかに記載の形質転換植物体の製造方法であって、
請求項6に記載のベクターであって外来性の目的タンパク質のコードするDNAを含むベクターを植物細胞に導入して請求項7~9のいずれかに記載の形質転換細胞を取得し当該形質転換細胞から植物体を再生させる工程を含む方法。

【請求項16】
 
請求項11~13のいずれかに記載の植物体を栽培する工程を備える、植物体の生産方法。

【請求項17】
 
請求項11~13のいずれかに記載の植物体を栽培する工程を備える、植物体種子の生産方法。

【請求項18】
 
請求項11~13のいずれかに記載の植物体を栽培する工程を備える、前記目的タンパク質の生産方法。

【請求項19】
 
植物体の種子において目的タンパク質の発現を促進させるためのDNA材料のスクリーニング方法であって、
前記種子において発現するタンパク質の1又は2以上の3’-UTR領域を前記DNA材料の候補として、
任意のプロモーターの制御下で評価用タンパク質をコードするDNAの下流に前記候補及びさらに3’側に前記植物体において作動可能なターミネーターを連結させたDNAを保持する形質転換細胞から植物体を再生し、
前記植物体から収穫した種子における前記評価用タンパク質の発現量を評価する工程と、
を備える、方法。
IPC(International Patent Classification)
F-term
State of application right Registered


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