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(In Japanese)細胞の再プログラミング誘導方法、および多能性細胞の製造方法

Patent code P170014091
File No. (S2014-0954-N0)
Posted date May 9, 2017
Application number P2016-519244
Date of filing May 11, 2015
International application number JP2015063457
International publication number WO2015174364
Date of international filing May 11, 2015
Date of international publication Nov 19, 2015
Priority data
  • P2014-098213 (May 11, 2014) JP
Inventor
  • (In Japanese)太田 訓正
  • (In Japanese)伊藤 尚文
Applicant
  • (In Japanese)国立大学法人熊本大学
Title (In Japanese)細胞の再プログラミング誘導方法、および多能性細胞の製造方法
Abstract (In Japanese)本発明の目的は、再生医療への応用において安全性が高い多能性細胞、およびその製造方法を提供することである。本発明の目的はまた、特には細胞の癌化の問題や、細胞内での菌の存在という、安全性に対する懸念がより少ない多能性細胞、およびその製造方法を提供することである。本発明により体細胞から多能性細胞を製造する方法が提供される。該方法は、体細胞に、生物由来のリボソーム分画を接触させることにより、細胞を再プログラミング誘導する工程を含む。本発明によりまた、生物由来のリボソーム分画を含む細胞再プログラミング誘導組成物が提供される。
Outline of related art and contending technology (In Japanese)

ES細胞は、胚性幹細胞と呼ばれ、1981年にはマウスの胚から、1998年にはヒ卜の胚から発見された。ES細胞は胎盤を構成する細胞以外のさまざまな種類の細胞に変化する能力(多能性)を持つ細胞として、それを用いた組織や器官を構築する研究が主に行われてきた。しかしながら、ES細胞は順調に成長すれば生命になる受精卵を利用しているため、倫理的に大きな問題を抱えている。もうひとつの大きな問題として、拒絶の問題がある。ES細胞をもとに作製した分化細胞や臓器を患者に移植しても、免疫系はこれらを非自己と認識し攻撃する可能性がある。

これらES細胞の問題を解決するために、京都大学の山中伸弥教授のグループは、通常は他の機能を持つ細胞に分化しない皮膚細胞からさまざまな種類の細胞に変化する能力を持つ細胞を開発し、iPS細胞と名付けた。山中ファクターと呼ばれる4つの因子(Oct3/4,Sox2,Klf4,c-Myc)をマウスやヒ卜の皮膚細胞にレ卜ロウイルスベクターを使って導入すると、細胞の初期化がおこり、ES細胞と同じく多能性を持つ細胞が作り出せることを示した[非特許文献1、および非特許文献2]。この時に用いる細胞は、患者自身の分化した皮膚などの体細胞に由来するため、iPS細胞から分化させた細胞を患者に移植しても免疫系はその臓器を自己と認識し移植が拒絶されることはない。iPS細胞の発見によりES細胞が抱えていた「生命倫理」と「拒絶反応」という2つの問題がクリアされたが、iPS細胞を標準化するための技術は開発途上にあり、細胞の癌化の問題を完全には払拭できていない。

また、特許文献1において、マイコバクテリウム・レプラエ菌またはその成分を用いて、再ブログラミングされた胚幹細胞(ES)様細胞を産生する方法が提案されている。特許文献1には、マイコバクテリウム・レプラエ菌そのものを、成人の分化細胞に接触・感染させることによる、再プログラミングされたES様細胞を産生する方法、この方法によって産生された細胞が記載されており、接触・感染させた菌は、産生されたES様細胞中に存在することが記載されている。しかしながら、マイコバクテリウム・レプラエ菌はらい菌であり、再生医療への応用には安全性の懸念がある。

また、本発明者により、発酵能を有する細菌である乳酸菌や納豆菌を、体細胞に感染させて、体細胞から多能性細胞を製造する方法が報告されている(特許文献2、非特許文献3)。さらに、本発明者らにより、乳酸菌からの粗抽出成分による、体細胞から多能性細胞を製造する方法が、PCT/JP2014/056948(国際公開公報WO2014/167943号公報)として特許出願されている。

Field of industrial application (In Japanese)

本発明は、細胞の再プログラミングを誘導する方法に関する。本発明はまた、そのような方法を用いて多能性細胞を製造する方法に関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
単離された哺乳類動物の体細胞またはがん細胞に、生物由来のリボソーム分画を接触させることにより、該細胞の再プログラミングを誘導する方法。

【請求項2】
 
前記体細胞またはがん細胞が、ヒト由来の細胞である請求項1に記載の方法。

【請求項3】
 
前記細胞が接着系細胞である、請求項1または2に記載の方法。

【請求項4】
 
さらに、リボソーム分画の細胞への接触の前に、前記接着系細胞を細胞支持体から剥離する工程を含む請求項3に記載の方法。

【請求項5】
 
前記細胞を剥離する工程がトリプシン処理により行われる請求項4に記載の方法。

【請求項6】
 
前記リボソーム分画の細胞への接触を、メチル-β-シクロデキストリンの存在下で行う、請求項1~5のいずれか一つに記載の方法。

【請求項7】
 
前記リボソーム分画が、グラム陰性菌由来のリボソーム分画である請求項1~6のいずれか一つに記載の方法。

【請求項8】
 
前記リボソーム分画が、グラム陽性菌由来のリボソーム分画である請求項1~6のいずれか一つに記載の方法。

【請求項9】
 
前記リボソーム分画が、酵母由来のリボソーム分画である請求項1~6のいずれか一つに記載の方法。

【請求項10】
 
前記リボソーム分画が、哺乳類動物由来のリボソーム分画である請求項1~6のいずれか一つに記載の方法。

【請求項11】
 
前記リボソーム分画が、30Sリボソーム分画である請求項7または8に記載の方法。

【請求項12】
 
前記リボソーム分画が、50Sリボソーム分画である請求項7または8に記載の方法。

【請求項13】
 
哺乳類動物の体細胞またはがん細胞から誘導された多能性細胞であって、以下の工程:
(i)単離された体細胞またはがん細胞に、生物由来のリボソーム分画を接触させて培養または維持する工程、および
(ii)形成された細胞塊を回収する工程、
を含む工程により製造された多能性細胞。

【請求項14】
 
前記体細胞またはがん細胞が、ヒト由来の細胞である請求項13に記載の多能性細胞。

【請求項15】
 
前記体細胞が接着系細胞である、請求項13または14に記載の多能性細胞。

【請求項16】
 
さらに、工程(i)の前に、前記接着系細胞を細胞支持体から剥離する工程を含む請求項15に記載の多能性細胞。

【請求項17】
 
前記細胞を剥離する工程がトリプシン処理により行なわれる請求項16に記載の多能性細胞。

【請求項18】
 
前記工程(i)を、メチル-β-シクロデキストリンの存在下で行う、請求項13~17のいずれか一つに記載の多能性細胞。

【請求項19】
 
前記リボソーム分画が、グラム陰性菌由来のリボソーム分画である請求項13~18のいずれか一つに記載の多能性細胞。

【請求項20】
 
前記リボソーム分画が、グラム陽性菌由来のリボソーム分画である請求項13~18のいずれか一つに記載の多能性細胞。

【請求項21】
 
前記リボソーム分画が、酵母由来のリボソーム分画である請求項13~18のいずれか一つに記載の多能性細胞。

【請求項22】
 
前記リボソーム分画が、哺乳類動物由来のリボソーム分画である請求項13~18のいずれか一つに記載の多能性細胞。

【請求項23】
 
前記リボソーム分画が、30Sリボソーム分画である請求項19または20に記載の多能性細胞。

【請求項24】
 
前記リボソーム分画が、50Sリボソーム分画である請求項19または20に記載の多能性細胞。

【請求項25】
 
請求項1~12のいずれか一つに記載の細胞の再プログラミングを誘導する方法を用いて製造された多能性細胞。

【請求項26】
 
請求項13~25のいずれか一つに記載の多能性細胞を分化誘導培地で培養することにより分化誘導された細胞。

【請求項27】
 
前記細胞が、脂肪細胞、骨細胞、軟骨細胞、神経細胞、心筋細胞、肝細胞、膵臓細胞、または血球細胞である、請求項26に記載の細胞。

【請求項28】
 
生物由来のリボソーム分画を含む細胞再プログラミング誘導組成物。

【請求項29】
 
ヒト由来の体細胞またはがん細胞の再プログラミング誘導のために用いられるである請求項28に記載の組成物。

【請求項30】
 
さらにメチル-β-シクロデキストリンを含む請求項28または29に記載の組成物。

【請求項31】
 
前記リボソーム分画が、グラム陰性菌由来のリボソーム分画である請求項28~30のいずれか一つに記載の組成物。

【請求項32】
 
前記リボソーム分画が、グラム陽性菌由来のリボソーム分画である請求項28~30のいずれか一つに記載の組成物。

【請求項33】
 
前記リボソーム分画が、酵母由来のリボソーム分画である請求項28~30のいずれか一つに記載の組成物。

【請求項34】
 
前記リボソーム分画が、哺乳類動物由来のリボソーム分画である請求項28~30のいずれか一つに記載の組成物。

【請求項35】
 
前記リボソーム分画が、30Sリボソーム分画である請求項31または32に記載の組成物。

【請求項36】
 
前記リボソーム分画が、50Sリボソーム分画である請求項31または32に記載の組成物。

【請求項37】
 
請求項28~36のいずれか一つに記載の組成物を含む抗がん剤。

【請求項38】
 
生物由来のリボソーム分画を含む、単離された哺乳類動物由来の体細胞またはがん細胞から多能性細胞を製造するための培地。

【請求項39】
 
さらにメチル-β-シクロデキストリンを含む請求項38に記載の培地。

【請求項40】
 
請求項28~36のいずれか一つに記載の組成物を含む、単離された哺乳類動物由来の体細胞またはがん細胞から多能性細胞を製造するための培地。
IPC(International Patent Classification)
F-term
Drawing

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JP2016519244thum.jpg
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