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(In Japanese)珪藻の新規形質転換ベクターおよびその含有する新規プロモーター配列 UPDATE_EN

Patent code P170014450
File No. (S2014-1454-N0)
Posted date Jul 13, 2017
Application number P2016-547436
Patent number P6573400
Date of filing Sep 7, 2015
Date of registration Aug 23, 2019
International application number JP2015075372
International publication number WO2016039300
Date of international filing Sep 7, 2015
Date of international publication Mar 17, 2016
Priority data
  • P2014-182607 (Sep 8, 2014) JP
Inventor
  • (In Japanese)伊福 健太郎
  • (In Japanese)菓子野 康浩
  • (In Japanese)福澤 秀哉
  • (In Japanese)梶川 昌孝
  • (In Japanese)小川 順
Applicant
  • (In Japanese)公立大学法人兵庫県立大学
Title (In Japanese)珪藻の新規形質転換ベクターおよびその含有する新規プロモーター配列 UPDATE_EN
Abstract (In Japanese)本発明は、配列番号1~10の塩基配列または当該塩基配列と80%以上の相同性を有する塩基配列を有する、藻類(例えば、珪藻)を形質転換するための新規プロモーター、それを含有する新規形質転換ベクター、およびそのベクターを用いる藻類の形質転換方法を提供する。
Outline of related art and contending technology (In Japanese)

藻類の1つである海洋性珪藻は、いわゆる黄色植物と呼ばれるグループに属する単細胞真核生物である。珪藻は世界のCO2固定量の20-40%程度を担うとも見積もられており、一次生産者として地球環境に極めて重要な生物群である。珪藻類は、EPA(エイコサペンタエン酸)に代表されるような、人間にとって有用な油脂などを合成する生物でもある。一般に、生物を工業的に利用するには、形質転換技術が用いられるが、藻類の形質転換効率は低いことが知られている。形質転換効率を上げるべく、種々の研究がなされているものの、依然としてその形質転換方法は限定的である。特に、海洋性中心目珪藻の1つであるツノケイソウについては、その遺伝子導入方法が研究されているがその形質転換効率は低い。Thalassiosira pseudonana由来プロモーター含有Tpfcp/natプラスミドを用いたChaetoceros sp.の形質転換では、形質転換効率は1.5~6形質転換体/108細胞と非常に低く、しかも導入遺伝子の発現は検出されなかった(非特許文献1)。

Field of industrial application (In Japanese)

本発明は藻類を形質転換するための、新規プロモーター、当該プロモーターを含むベクター、および当該ベクターを用いる藻類の形質転換方法に関するものである。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
配列番号1~10いずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチド。

【請求項2】
 
請求項1に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。

【請求項3】
 
請求項1に記載のポリヌクレオチドおよびターミネーター配列を含む第1発現カセット;および
請求項1に記載のポリヌクレオチド、薬剤耐性遺伝子、およびターミネーター配列を含む第2発現カセット;
を含む請求項2に記載のベクター。

【請求項4】
 
請求項2または3のベクターを宿主ツノケイソウ細胞へ導入することを特徴とする、ツノケイソウの形質転換方法。

【請求項5】
 
(1)配列番号1~10いずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチド;
(2)配列番号1~10いずれかの塩基配列に対して90%以上の相同性を有し、かつ珪藻に目的遺伝子の発現をもたらすプロモーターとして機能するポリヌクレオチド;または
(3)配列番号1~10いずれかの塩基配列に対して1個以上50個以下の塩基が付加、欠失および/または置換された塩基配列を有し、かつ珪藻に目的遺伝子の発現をもたらすプロモーターとして機能するポリヌクレオチド
から選択されるポリヌクレオチドおよび脂肪酸ヒドロキシラーゼ遺伝子を含むベクターを宿主珪藻細胞へ導入して形質転換体を得、当該形質転換体を培養することによってリシノール酸を得ることを特徴とする、リシノール酸の製造方法。

【請求項6】
 
該ポリヌクレオチドが配列番号1~10いずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドである、請求項5に記載の方法。

【請求項7】
 
該宿主珪藻細胞が宿主ツノケイソウ細胞である、請求項5に記載の方法。

【請求項8】
 
該ポリヌクレオチドが配列番号1~10いずれかの塩基配列からなるポリヌクレオチドであり、かつ、該宿主珪藻細胞が宿主ツノケイソウ細胞である、請求項5に記載の方法。
IPC(International Patent Classification)
F-term
State of application right Registered
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