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EMBEDDING METHOD FOR ELECTRON MICROSCOPE USING MONOMER FOR HIGHLY HYDROPHILIC POLYMER AS MAIN AGENT

Patent code P170014701
File No. OU-0313
Posted date Dec 7, 2017
Application number P2016-069228
Publication number P2017-181316A
Date of filing Mar 30, 2016
Date of publication of application Oct 5, 2017
Inventor
  • (In Japanese)北村 裕和
  • (In Japanese)伊藤 葵
  • (In Japanese)藤倉 義久
Applicant
  • (In Japanese)国立大学法人大分大学
Title EMBEDDING METHOD FOR ELECTRON MICROSCOPE USING MONOMER FOR HIGHLY HYDROPHILIC POLYMER AS MAIN AGENT
Abstract PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new embedding agent using a highly hydrophilic resin, which serves as a substitute for formalin as a base material, and to provide an embedding method for electron microscope using the embedding agent.
SOLUTION: A tissue embedding method includes immersing a tissue in an embedding liquid, and standing and polymerizing the liquid, where the embedding liquid is obtained by adding, to 100 pts.wt. of an aqueous solution, 1-5 pts.wt. of a crosslinking agent, 0.0001-0.001 pt.wt. of a polymerization accelerator and, as other monomer(s), 0-100 pts.wt. of one or more monomers selected from the group consisting of methyl methacrylate, hydroxyethyl methacrylate, dodecyl methacrylate, 2-methyl-2-propenoic acid C12-16 alkyl ester, and (1-methylethylidene)bis(4,1-phenyleneoxy-2,1-ethanediyl)bismethacrylate, the aqueous solution containing N-vinyl-2-pyrrolidone (NVP), which has high hydrophilicity and becomes a polymer when polymerized, in a monomer concentration of 98 to 100%.
Outline of related art and contending technology (In Japanese)

免疫組織細胞化学における透過型電子顕微鏡による観察領域では、既存のLowicryl K4MやLR-White等の電子顕微鏡用包埋剤を用いても、生物学的試料、例えば抗体の種類によっては観察できないか、または非常に不十分な結果しか得ることができない場合が多い。

例えば、透過電子顕微鏡試料の電子染色法として、エポキシ樹脂に包埋・重合し薄切した細胞組織を酢酸ウラニウム水溶液に浸漬し、これを洗浄後、鉛染色液に浸漬後、洗浄する方法が知られている(特許文献1)。また、細胞内に水分とラジカルソースを含む組織を包埋標本化するに際して、組織を高親水性高分子に架橋剤と重合開始制御剤を含有させた高親水性高分子モノマー溶液に浸漬し、窒素ガスバブリング後、静置して重合させる組織包埋方法も知られている(特許文献2、3)。しかしながら、これらの包埋方法では、例えば、100nm以下の極薄透過電子顕微鏡用の試料を調製することが困難であり、多種の抗体の染色観察には不適用である。そのため、高親水性樹脂を基礎素材とした新しい包埋剤を開発する必要があった。

Field of industrial application (In Japanese)

本発明は、ホルマリン代替液となる高親水性高分子モノマーを主剤とする電子顕微鏡用包埋方法に関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
高い親水性を有し、重合すると高分子になるN-ビニル-2-ピロリドンを用いて、当該N-ビニル-2-ピロリドンの濃度を98~100%にした水溶液に、該水溶液100重量部に対し1~5重量部の架橋剤、0.0001~0.001重量部の重合促進剤、ならびに他のモノマーとして、メタクリル酸メチル、メタクリル酸ヒドロキシエチル、メタクリル酸ドデシル、2-メチル-2-プロペン酸、C12-16アルキルエステル、(1-メチルエチリデン)ビス(4,1-フェニレンオキシ-2,1-エタンジイル)ビスメタクリレートからなる群から1種以上選択される0~100重量部のモノマーを添加した包埋用液体に組織を浸漬し、静置して重合させることを特徴とする組織包埋方法。

【請求項2】
 
架橋剤が、N,N’-メチレン-ジアクリルアミドが選択される、請求項1に記載の組織包埋方法。

【請求項3】
 
重合促進剤が、Qcu-1およびQcu-3からなる群から選択される、請求項1または2に記載の組織包埋方法。
IPC(International Patent Classification)
F-term
State of application right Published
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