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DETECTION METHOD OF APTAMER AND ANTIBODY

Patent code P180014864
File No. S2016-0933-N0
Posted date Apr 18, 2018
Application number P2016-159227
Publication number P2018-027024A
Date of filing Aug 15, 2016
Date of publication of application Feb 22, 2018
Inventor
  • (In Japanese)池袋 一典
  • (In Japanese)齊藤 太郎
  • (In Japanese)轟木 堅一郎
  • (In Japanese)中野 達基
  • (In Japanese)豊岡 利正
Applicant
  • (In Japanese)国立大学法人東京農工大学
  • (In Japanese)静岡県公立大学法人
Title DETECTION METHOD OF APTAMER AND ANTIBODY
Abstract PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a tool capable of identifying and efficiently detecting a specific idiotype antibody.
SOLUTION: A polynucleotide represented by formula (I) is an aptamer which may bind to an immune globulin G antibody molecule: (L1)x-[(P)-(L2)y]n-(L3)z (I) (where, P is a polynucleotide sequence expressed by either of sequence number 1-4; L1, L2 and L3 are a linker sequence consisting of a polynucleotide sequence which does not interact with P; N is an integer of 1 or more; and x, y and z independently represent an integer of 0 or 1, wherein provided that when n is 2 or more, a plurality of ys may be the same or different).
Outline of related art and contending technology (In Japanese)

近年、抗体医薬品とその関連製品の開発が盛んになっている。抗体医薬品とは疾患関連因子に特異的に結合する抗体を用いたバイオ医薬品であり、高い薬効と低い副作用が期待されている。抗体医薬品の多くは、免疫原性の低下のために、抗原結合部位として機能する超可変領域(CDR)のみが異種由来、残りの領域はヒト免疫グロブリンG(IgG)で構成されるヒト化モノクローナル抗体である。
一方、新しい医薬品の開発にはその医薬品の有効性や安全性を評価するための薬物動態試験が必須である。生体試料中の薬物の定量は臨床、非臨床においても薬物動態試験において重要な分析要素である。

抗体医薬の薬物動態(PK)と薬力学(PD)については、主に酵素結合免疫吸着検定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay:ELISA)、又は化学発光による免疫測定のようなリガンド結合法(Ligand Binding Assay:LBA)(例えば、非特許文献1~4)が汎用されている。

一方、任意の分子と特異的に結合する核酸分子であるアプタマーが知られている。アプタマーは、モノクローナル抗体の親和性及び特異性に匹敵する高い親和性及び特異性を有して、例えばタンパク質及び小分子などの種々の標的分子を認識することができる、核酸リガンドである。アプタマー、特にDNAアプタマーは、容易かつ安価に合成され、化学的に改変することができる。更に、それらは、それらが標的に結合する際に構造変化が起こるよう設計することができる。これらのアプタマーの利点を使って、特定の分子を検出する検出方法が提案されている(例えば、特許文献1)。

Field of industrial application (In Japanese)

本発明は、免疫グロブリンG(以下、IgGと称する)抗体を認識するアプタマー及びこれを用いる抗体を検出する方法に関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
下記式(I)で示されるポリヌクレオチドであって、免疫グロブリンG抗体分子に結合し得るアプタマー:
(L1)x-[(P)-(L2)yn-(L3)z (I)
(式中、
Pは、以下の配列番号1~配列番号4のいずれかで示されるポリヌクレオチド配列を表し、
GCGGTTGGTGGTAGTTACGTTCGC(配列番号1)
CCGGTTGGTGGTAGTTACGTTCGG(配列番号2)
GGGGTTGGTGGTAGTTACGTTCCC(配列番号3)
CGGGTTGGTGGTAGTTACGTTCCG(配列番号4)
L1、L2及びL3は、Pと相互作用しないポリヌクレオチド配列からなるリンカー配列を表し、
nは、1以上の整数を表し、
x、y及びzは、それぞれ独立に0又は1の整数を表し、ただし、nが2以上の場合に、複数のyは同一であっても異なっていてもよい)。

【請求項2】
 
L1、L2及びL3は、それぞれ独立に、3~60ヌクレオチドからなるポリヌクレオチド配列である請求項1記載のアプタマー。

【請求項3】
 
L1~L3のうち少なくとも2つのリンカー配列を含み、存在するリンカー配列が、少なくとも1つの他のリンカー配列の少なくとも一部と互いに相互作用可能なポリヌクレオチド配列からなる請求項1又は請求項2記載のアプタマー。

【請求項4】
 
ヌクレオチドの核酸部分が、DNA、RNA、及び人工核酸からなる群より選択される少なくとも1つである請求項1~請求項3のいずれか1項記載のアプタマー。

【請求項5】
 
抗体分子が、血管内皮増殖因子に対する抗体分子である請求項1~請求項4のいずれか1項記載のアプタマー。

【請求項6】
 
抗体分子が、ベバシズマブである請求項1~請求項5のいずれか1項記載のアプタマー。

【請求項7】
 
抗体分子が、抗体全体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv断片、ダイアボディー、単鎖抗体分子、及び、CDRを含む抗体断片からなる群より選択される少なくともひとつである請求項1~請求項6のいずれか1項記載のアプタマー。

【請求項8】
 
下記式(I)で示されるポリヌクレオチド:
(L1)x-[(P)-(L2)yn-(L3)z (I)
(式中、
Pは、以下の配列番号1~配列番号4のいずれかで示されるポリヌクレオチド配列を表し、
GCGGTTGGTGGTAGTTACGTTCGC(配列番号1)
CCGGTTGGTGGTAGTTACGTTCGG(配列番号2)
GGGGTTGGTGGTAGTTACGTTCCC(配列番号3)
CGGGTTGGTGGTAGTTACGTTCCG(配列番号4)
L1、L2及びL3は、Pと相互作用しないポリヌクレオチド配列からなるリンカー配列を表し、
nは、1以上の整数を表し、
x、y及びzは、それぞれ独立に0又は1の整数を表し、ただし、nが2以上の場合に、複数のyは同一であっても異なっていてもよい)。

【請求項9】
 
配列番号1~配列番号10のいずれかで示されるヌクレオチド配列からなる請求項8記載のポリヌクレオチド。

【請求項10】
 
以下の(A)又は(B)のポリヌクレオチドである請求項8記載のポリヌクレオチド:
(A) 配列番号1~配列番号10のポリヌクレオチド配列において、1個又は数個の塩基が、付加、欠失、又は置換された配列を有し、IgG抗体分子に結合し得るポリヌクレオチド、
(B) 配列番号5~配列番号10の配列において、式(I)中L1~L3に相当する部分の配列が10%以上の配列同一性を有し、IgG抗体分子に結合し得るポリヌクレオチド。

【請求項11】
 
核酸部分が、DNA、RNA、及び人工核酸からなる群より選択される少なくとも1つである請求項8~請求項10のいずれか1項記載のポリヌクレオチド。

【請求項12】
 
検査対象の免疫グロブリンG抗体分子を含有する可能性がある試料を準備すること、
請求項1~請求項7のいずれか1項記載のアプタマーを、準備された試料と接触させること
を含む抗体検出方法。

【請求項13】
 
接触後の試料から、アプタマーと抗体分子との複合体の検出を行うこと、を含む請求項12記載の検出方法。

【請求項14】
 
試料が、体液試料である請求項12又は請求項13記載の検出方法。

【請求項15】
 
抗体分子が、血管内皮増殖因子に対する抗体である請求項12~請求項14のいずれか1項記載の検出方法。

【請求項16】
 
抗体分子が、ベバシズマブである請求項12~請求項15のいずれか1項記載の検出方法。
IPC(International Patent Classification)
F-term
Drawing

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JP2016159227thum.jpg
State of application right Published
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