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METHODS FOR DETECTING OSTEOBLASTS IN A CELL POPULATION OBTAINABLE BY INDUCING DIFFERENTIATION OF PLURIPOTENT STEM CELLS TO OSTEOBLASTS

Patent code P200016866
File No. 6026
Posted date May 11, 2020
Application number P2018-043297
Publication number P2019-154283A
Date of filing Mar 9, 2018
Date of publication of application Sep 19, 2019
Inventor
  • (In Japanese)秋吉 一成
  • (In Japanese)下田 麻子
Applicant
  • (In Japanese)国立大学法人京都大学
Title METHODS FOR DETECTING OSTEOBLASTS IN A CELL POPULATION OBTAINABLE BY INDUCING DIFFERENTIATION OF PLURIPOTENT STEM CELLS TO OSTEOBLASTS
Abstract PROBLEM TO BE SOLVED: To provide methods for detecting osteoblasts in a cell population obtainable by inducing differentiation of pluripotent stem cells to osteoblasts.
SOLUTION: Disclosed herein is a method for detecting osteoblasts in a cell population obtainable by inducing differentiation of pluripotent stem cells to osteoblasts, comprising the steps of: (1) evaluating the binding ability b of lectins including at least one lectin selected from the group consisting of AOL, ECA, BPL, PNA, WFA and SBA to the surface of exosomes derived from the cell population; and (2) comparing the binding ability b obtained in step (1) with a binding ability b0 of the same lectins to the surface of exosomes derived from undifferentiated pluripotent stem cells, where the presence of osteoblasts in the cell population is determined when the b is higher than the b0 about the at least one lectin.
Outline of related art and contending technology (In Japanese)

多能性幹細胞を骨芽細胞へと分化誘導することにより得られうる骨芽細胞を含有する細胞集団について、研究開発が盛んに行われている。これらの細胞集団は、医薬(細胞医薬品)として、あるいは創薬や発生等における研究ツールとしての有用性が注目されている。多能性幹細胞としては、目的に応じて、間葉系幹細胞等の体性幹細胞、並びにiPS細胞及びES細胞等の人工多能性幹細胞が幅広く利用されている。

これらの細胞集団を利用するに際しては、骨芽細胞への分化誘導が正常に、かつ効率的に行われていることを確認することが有用である。具体的には、分化状態などの判別方法が重要となる。従来、骨芽細胞への分化の確認はアルカリホスファターゼ、オステオカルシン、又はI型コラーゲン等の発現量を指標として行われていた(特許文献1)。しかし、これらのマーカーは骨組織特異的ではないため、これらを指標とする判別方法には不十分な面もあった。

また、細胞表面の糖鎖構造の変化を指標として、ヒト間葉系幹細胞の未分化状態及び骨分化状態をそれぞれ判別する方法も提案されている(特許文献2、3)。さらに、細胞膜タンパク質の量変化を指標として、ヒト間葉系幹細胞の未分化状態及び骨分化状態をそれぞれ判別する方法も提案されている(特許文献4)。

Field of industrial application (In Japanese)

本発明は、多能性幹細胞を骨芽細胞へと分化誘導することにより得られうる細胞集団から骨芽細胞を検出する方法、及びその方法のために用いられるキットに関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
多能性幹細胞を骨芽細胞へと分化誘導することにより得られうる細胞集団から骨芽細胞を検出する方法であって:
(1)AOL、ECA、BPL、PNA、WFA及びSBAからなる群より選択される少なくとも一種のレクチンを含むレクチンと、前記細胞集団に由来するエクソソームの表面との結合能bを評価する工程;及び
(2)前記レクチンと、未分化の前記多能性幹細胞に由来するエクソソームの表面との結合能b0と、前記工程(1)において得られた結合能bとを、同一レクチン間においてそれぞれ比較する工程を含み、
少なくとも一種の前記レクチンに関し、前記bが、前記b0よりも高いときに、前記細胞集団における骨芽細胞の存在を示す、方法。

【請求項2】
 
全種の前記レクチンに関し、前記bが、前記b0よりも高いときに、前記細胞集団における骨芽細胞の存在を示す、請求項1に記載の方法。

【請求項3】
 
前記bが、前記b0に対して2倍以上であるときに、前記細胞集団における骨芽細胞の存在を示す、請求項1又は2に記載の方法。

【請求項4】
 
多能性幹細胞を骨芽細胞へと分化誘導することにより得られうる細胞集団から骨芽細胞を検出するために用いられるキットであって、
AOL、ECA、BPL、PNA、WFA及びSBAからなる群より選択される少なくとも一種のレクチンを含むレクチンと、前記細胞集団に由来するエクソソームの表面との結合能を評価することのできる手段を含む、キット。

【請求項5】
 
前記手段が、レクチンアレイである、請求項4に記載のキット。
IPC(International Patent Classification)
F-term
State of application right Published
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