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コリバクチンおよびコリバクチン産生菌の検出方法および検出プローブ

国内特許コード	P200017315
整理番号	(S2017-0970-N0)
掲載日	2020年12月2日
出願番号	特願2019-539475
出願日	平成30年8月27日(2018.8.27)
国際出願番号	JP2018031489
国際公開番号	WO2019044736
国際出願日	平成30年8月27日(2018.8.27)
国際公開日	平成31年3月7日(2019.3.7)
優先権データ	特願2017-163079 (2017.8.28) JP
発明者	渡辺賢二恒松雄太佐藤道大
出願人	静岡県公立大学法人
発明の名称	コリバクチンおよびコリバクチン産生菌の検出方法および検出プローブ
発明の概要	本発明は、コリバクチンおよびコリバクチン産生菌の検出方法および検出プローブを提供する。本発明によれば、例えば、組織検体および糞便試料を用いたミリストイルアスパラギンの検出、およびＣｌｂＰの酵素活性を検出する蛍光プローブが提供される。
従来技術、競合技術の概要	コリバクチンは、大腸がんの原因因子として知られ、大腸菌の特定の一群により腸内で産生される。コリバクチンは、動物細胞中のＤＮＡを切断する活性があると考えられ、大腸患者の６７％、炎症性腸疾患患者の４０％からコリバクチン産生菌が検出されたとの報告もなされている。コリバクチンに関しては、コリバクチンのプロドラッグモチーフとしてのミリストイルアスパラギンの構造およびＬＣ－ＭＳによる検出が報告されている（非特許文献１）。現在までのところ、コリバクチンの化学構造は決定されていない。
産業上の利用分野	本発明は、コリバクチンおよびコリバクチン産生菌の検出方法および検出プローブに関する。
特許請求の範囲	【請求項1】以下に示される、化合物または蛍光プローブ：（Ａ）クマリン骨格の７位にアミノ基を有するクマリン系蛍光色素の当該アミノ基とミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とがアミド結合で連結した化合物または蛍光プローブ；（Ｂ）ナフタルイミド骨格の４位にアミノ基を有するナフタルイミド系蛍光色素の当該アミノ基とミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とがアミド結合で連結した化合物または蛍光プローブ；（Ｃ）２位にアミノ基を有するナフタレン、ピレンまたはアントラセンの当該アミノ基とミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とがアミド結合で連結した化合物または蛍光プローブ；（Ｄ）キサンテン骨格の３位および／または９位にアミノ基を有するローダミン系蛍光色素の当該アミノ基の一部または全部のそれぞれとミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とがアミド結合で連結した化合物または蛍光プローブ；（Ｅ）Ｂｏｄｉｐｙ母核の１位および／または７位にアミノ基を有するＢｏｄｉｐｙ系蛍光色素の当該アミノ基の一部または全部のそれぞれとミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とがアミド結合で連結した化合物または蛍光プローブ；（Ｆ）上記（Ａ）～（Ｅ）において、前記カルボキシル基と前記アミノ基とがアラニン（－ＮＨ－ＣＨ（ＣＨ_３）－ＣＯ－）で連結された化合物（それぞれアラニンとアミド結合を形成する）または蛍光プローブ；（Ｇ）ミリストイルアスパラギンのカルボキシル基と水酸基がフリーになることで蛍光性となる蛍光基であるｏＦｌｕの水酸基とが、自己開裂性リンカーを介して連結した化合物であって、自己開裂性リンカーは、ミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とアミド結合で連結しており、当該アミド結合が加水分解されると、分解してｏＦｌｕの水酸基をフリーにする、化合物または蛍光プローブ；および（Ｈ）ミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とアミド結合により連結した蛍光色素を有する化合物であって、アミド結合がＣｌｂＰ依存的に開裂すると、その後、蛍光を発する、化合物または蛍光プローブからなる群から選択される、化合物または蛍光プローブ。【請求項2】請求項１に記載の化合物または蛍光プローブであって、（Ａ）クマリン骨格の７位にアミノ基を有するクマリン系蛍光色素の当該アミノ基とミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とがアミド結合で連結した化合物または蛍光プローブである、化合物または蛍光プローブ。【請求項3】請求項１に記載の化合物または蛍光プローブであって、（Ｂ）ナフタルイミド骨格の４位にアミノ基を有するナフタルイミド系蛍光色素の当該アミノ基とミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とがアミド結合で連結した化合物または蛍光プローブである、化合物または蛍光プローブ。【請求項4】請求項１に記載の化合物または蛍光プローブであって、（Ｃ）２位にアミノ基を有するナフタレン、ピレンまたはアントラセンの当該アミノ基とミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とがアミド結合で連結した化合物または蛍光プローブである、化合物または蛍光プローブ。【請求項5】請求項１に記載の化合物または蛍光プローブであって、（Ｄ）キサンテン骨格の３位および／または９位にアミノ基を有するローダミン系蛍光色素の当該アミノ基の一部または全部のそれぞれとミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とがアミド結合で連結した化合物または蛍光プローブである、化合物または蛍光プローブ。【請求項6】請求項１に記載の化合物または蛍光プローブであって、（Ｅ）Ｂｏｄｉｐｙ母核の１位および／または７位にアミノ基を有するＢｏｄｉｐｙ系蛍光色素の当該アミノ基の一部または全部のそれぞれとミリストイルアスパラギンのカルボキシル基とがアミド結合で連結した化合物または蛍光プローブである、化合物または蛍光プローブ。【請求項7】請求項１～６のいずれか一項に記載の化合物または蛍光プローブを含む、コリバクチン産生微生物を検出することに用いるための、コリバクチン生合成遺伝子クラスターを有する微生物を検出することに用いるための、および／またはコリバクチンを検出することに用いるための組成物。【請求項8】組織検体または糞便試料を対象とする、請求項７に記載の組成物。【請求項9】組織検体または糞便試料が、ヒトの組織検体または糞便試料である、請求項８に記載の組成物。【請求項10】生体試料においてコリバクチンまたはコリバクチン産生大腸菌の存在を検出する方法であって、生体試料中でミリストイルアスパラギンの有無を検出することを含む、方法。【請求項11】生体試料が、組織検体または糞便試料である、請求項１０に記載の方法。【請求項12】生体試料が、ヒト由来である、請求項１０または１１に記載の方法。
国際特許分類(IPC)	G01N 33/68 蛋白質またはペプチドまたはアミノ酸を含むもの C12Q 1/04 微生物の存在または種類の決定；抗生物質または殺細菌剤の試験のための選択培地の使用；そのための化学指示薬を含む組成物
Fターム	2G045AA25 病気の検査 2G045CB04 便 2G045DA35 アミノ酸Ｆ 4B063QA01 定量、存否確認（ＦＷ） 4B063QA18 物質の同定、微生物の同定 4B063QQ06 細菌（←放線菌、マイコプラズマ） 4B063QQ20 その他（ＦＷ） 4B063QR10 加水分解酵素　ＥＣ３． 4B063QR75 細菌（←放線菌、マイコプラズマ） 4B063QS03 標識、発色団等の導入 4B063QS36 成分、標識の可視化、信号発生処理 4B063QX02 発光、消光（例．蛍光、化学発光）
出願権利状態	公開