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MEDIUM AND METHOD FOR IN VITRO CULTURE OF SWINE EMBRYO

Patent code P04A005305
Posted date Jan 11, 2005
Application number P2001-218477
Publication number P2003-024055A
Patent number P3680130
Date of filing Jul 18, 2001
Date of publication of application Jan 28, 2003
Date of registration May 27, 2005
Inventor
  • (In Japanese)吉岡 耕治
  • (In Japanese)鈴木 千恵
  • (In Japanese)岩村 祥吉
Applicant
  • (In Japanese)国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構
Title MEDIUM AND METHOD FOR IN VITRO CULTURE OF SWINE EMBRYO
Abstract PROBLEM TO BE SOLVED: To prepare an in-vitro culture medium for swine embryo that includes pyruvic acid or lactic acid or salts of them, and taurine or a precursor thereof as essential components.
SOLUTION: The in-vitro culture medium of swine embryo includes pyruvic acid or lactic acid or salts of them and taurine or a precursor hereof as essential components.
Outline of related art and contending technology (In Japanese)


トランスジェニック動物やクローン技術などの発生工学における基盤技術の1つとして胚培養及び胚移植がある。ブタにおいては、受精直後の1細胞期胚を24~36時間体外培養し、得られた2~4細胞期胚を受胚ブタ(代理母)に移植することによって産子が得られている。また、1細胞期胚を96時間培養して得られた8細胞期胚を移植することによって産子が得られたという報告もある。さらに最近では、体外成熟又は体外受精により作出した胚を胚盤胞期まで成長させ、得られた胚盤胞を移植して産子が得られたという発表もあった。



受精後の胚を胚盤胞期まで培養した場合、胚の初期発生の進行を培養において確認し、正常と判定された胚のみを選別して移植することができるので、不必要な移植を回避することができるとともに、個体生産の効率を高めることができるなど、有利な点がある。



しかし、体外培養により胚盤胞期まで成長させた胚(以下、体外培養胚と称す)を移植した受胚ブタの受胎率は依然として低い。現在、ブタ胚の体外培養用培地としては、通常、NCSU-23培地が用いられているが、NCSU-23培地を用いて培養された体外培養胚は、体内発生した胚盤胞(以下、体内発生胚盤胞と称す)に比べ、胚の細胞数、とりわけ将来胎子になる内部細胞塊の細胞数と将来胎膜になる栄養膜外胚葉の細胞数の比が比べ著しく劣っていることが指摘されており、そのような体外培養による胚の品質の低さが受胎率に影響していると考えられる。



また、マウス、ウシ等の他の動物の胚を培養するための種々の体外培養用培地、例えば、Whitten培地、TCM199培地等が報告されているが、これら培地をブタに適用した場合、4細胞期で発育が停止するといった問題がある。
従って、体内発生胚盤胞に劣らない体外培養胚を作出し、受胎率を高めることが可能なブタ胚の体外培養用培地が求められている。

Field of industrial application (In Japanese)


本発明は、ブタ胚の体外培養用培地及び培養方法に関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
ピルビン酸又はその塩0.1~0.5mM、乳酸又はその塩12mM及びタウリン又はその前駆物質1~10mMを必須成分として含むブタ胚の体外培養用培地。

【請求項2】
 
無機イオン成分、エネルギー基質成分及びアミノ酸成分からなる群から選択された1又は2以上の成分をさらに含んでいる、請求項1記載の培地。

【請求項3】
 
無機イオン成分が97~119mMの塩化ナトリウム、4~11mMの塩化カリウム、0.3~0.4mMのリン酸二水素カリウム、0.3~0.5mMの硫酸マグネシウム、20~30mMの炭酸水素ナトリウムである、請求項2記載の培地。

【請求項4】
 
アミノ酸成分が0.1~2mMのグルタミン、0.02~0.2mMのグルタミンを除く必須アミノ酸、0.05~0.15mMの非必須アミノ酸である、請求項2記載の培地。

【請求項5】
 
請求項1~4のいずれかに記載の培地中でブタ胚を培養することを特徴とするブタ胚の体外培養方法。

【請求項6】
 
胚が1細胞期胚である請求項5記載の方法。
IPC(International Patent Classification)
F-term
Drawing

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13422_01SUM.gif
State of application right Registered


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