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METHOD FOR EXPRESSING GENE-RECOMBINANT PROTEIN HAVING SUGAR CHAIN WITH ADDED CYANURIC ACID IN CELL OF INSECT

Patent code P04A005313
Posted date Jan 11, 2005
Application number P2001-270914
Publication number P2003-070469A
Patent number P3598374
Date of filing Sep 6, 2001
Date of publication of application Mar 11, 2003
Date of registration Sep 24, 2004
Inventor
  • (In Japanese)渡邉 聡子
  • (In Japanese)國保 健浩
  • (In Japanese)窪田 宜之
  • (In Japanese)犬丸 茂樹
Applicant
  • (In Japanese)国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構
Title METHOD FOR EXPRESSING GENE-RECOMBINANT PROTEIN HAVING SUGAR CHAIN WITH ADDED CYANURIC ACID IN CELL OF INSECT
Abstract PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for expressing a recombinant protein having added cyanuric acid, which is advantageous for administration to an animal, in a cell of an insect.
SOLUTION: This method for expressing the recombinant protein having a sugar chain with added cyanuric acid in the insect or the cell of the insect includes inhibiting, suppressing or removing N-acetyl glucosaminidase activities possessed by the cell of the insect.
Outline of related art and contending technology (In Japanese)



糖タンパク質のN結合型糖鎖は、タンパク質の生物学的活性や生体内での安定性において重要な役割を果たしている。シアル酸は糖鎖の構成成分の一つであり、N結合型糖鎖の末端に結合し、特に重要である。





従来のバキュロウイルスと昆虫細胞を用いた遺伝子組換えタンパク質の発現方法では、発現タンパク質に付加されるN結合型糖鎖は昆虫細胞に特徴的な構造となり、哺乳類で多く見られているシアル酸の付加による修飾であるシアル化はおこらない。すなわち、バキュロウイルス-昆虫細胞発現系を用いて発現させたタンパク質ではN結合型糖鎖のほとんどはシアル酸の付加がないトリマンノシルコア型である。昆虫細胞ではゴルジ体に局在するN-アセチルグルコサミニダーゼ(GlcNAcase)が昆虫細胞で発現される糖タンパク質に付加されるN結合型糖鎖を昆虫細胞に特徴的な構造に構築する活性を有する。すなわち、合成経路のN結合型糖鎖末端のアセチルグルコサミン残基を加水分解することによりシアル酸の結合し得る糖鎖の伸長が起こらないと考えられる(図6)。昆虫細胞型の糖鎖を持つ組換えタンパク質を動物に投与した場合には、昆虫型糖鎖は異物として認識され、あるいは生体内に長くとどまらないなどの問題が生じていた。このため、昆虫細胞で哺乳類由来のタンパク質を発現させても、動物生体内での安定性が低く、動物への投与には適さなかった。

Field of industrial application (In Japanese)



本発明は、動物への投与に有利なシアル酸が付加された組換えタンパク質を昆虫細胞で発現させる方法に関する。

Scope of claims (In Japanese)
【請求項1】
 
昆虫細胞の持つN-アセチルグルコサミニダーゼ活性を抑制または害することを含む、シアル酸が付加された糖鎖を有する組換えタンパク質を昆虫または昆虫細胞で発現する方法。

【請求項2】
 
昆虫がカイコである請求項1記載の方法。

【請求項3】
 
昆虫細胞の持つN-アセチルグルコサミニダーゼ活性を抑制または害し、哺乳動物由来のタンパク質遺伝子を導入したバキュロウイルスを感染させた昆虫細胞を培養し該タンパク質を発現させることを含む、請求項1記載のシアル酸が付加された糖鎖を有する組換えタンパク質を製造する方法。

【請求項4】
 
N-アセチルグルコサミニダーゼ活性の抑制または害が、N-アセチルグルコサミニダーゼ活性阻害剤の添加により行われる、請求項1~3のいずれか1項記載の方法。

【請求項5】
 
哺乳動物由来のタンパク質遺伝子を導入したバキュロウイルスを感染させる前の昆虫細胞をN-アセチルグルコサミニダーゼ阻害剤で前処理することを含む請求項4記載の方法。

【請求項6】
 
N-アセチルグルコサミニダーゼ活性阻害剤が、2-アセトアミド-1、2-ジデオキシノジリマイシンである請求項4または5記載の方法。

【請求項7】
 
タンパク質がインターフェロン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子およびインターロイキンからなる群から選択される請求項1~6のいずれか1項記載の方法。

【請求項8】
 
タンパク質がインターフェロン-τである請求項7記載の方法。
IPC(International Patent Classification)
F-term
Drawing

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13427_01SUM.gif
State of application right Registered


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