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(In Japanese)新規ユウロピウム錯体を用いた大腸菌O157ベロ毒素遺伝子検出系の構築

Research report code R000000400
Posted date Sep 30, 2002
Researchers
  • (In Japanese)上野 仁之
  • (In Japanese)鈴木 麻美絵
  • (In Japanese)八波 利恵
  • (In Japanese)山崎 勝弘
  • (In Japanese)椙谷 康一
  • (In Japanese)中村 聡
Affiliation
  • (In Japanese)東京工業大学大学院生命理工学研究科
  • (In Japanese)東京工業大学大学院生命理工学研究科
  • (In Japanese)東京工業大学院生命理工学研究科
  • (In Japanese)東京工業大学大学院生命理工学研究科
  • (In Japanese)東京工業大学大学院生命理工学研究科
  • (In Japanese)東京工業大学大学院生命理工学研究科
Research organization
  • (In Japanese)東京工業大学大学院生命理工学研究科
Report name (In Japanese)新規ユウロピウム錯体を用いた大腸菌O157ベロ毒素遺伝子検出系の構築
Technology summary (In Japanese)長い蛍光寿命を有するユウロピウム錯体をラベル剤とする,時間分解蛍光イムノアッセイ法が開発されている。本研究では,新規ユウロピウム錯体を利用したサンドイッチハイブリダイゼーションによる大腸菌O157ベロ毒素遺伝子検出系の構築を試みた。大腸菌O157のVT1およびVT2遺伝子のAサブユニット領域をキャッチングDNA,Bサブユニット領域をプローブDNAとし,これらを用いたサンドイッチハイブリダイゼーション系により,VT1・VT2両遺伝子の検出を試みた。キャッチングDNAをマイクロタイタープレートに固定後,PCR増幅したベロ毒素遺伝子断片をビオチン化プローブDNAと共に加えてハイブリダイゼーションを行い,ユウロピウム錯体で標識したストレプトアビジンを加え,時間分解蛍光測定を行った。VT2遺伝子検出系では,VT2遺伝子が定量的に効率よく検出され,VT1遺伝子は殆ど検出されなかった。VT1遺伝子検出系ではVT1遺伝子のみが測定可能であり,VT2遺伝子は殆ど検出されなかった。以上より,サンドイッチハイブリダイゼーション系は両遺伝子の測り分けが可能であることを示した。
Drawing

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R000000400_01SUM.gif
Research field
  • Complexes of 3 groups
  • Structure and chemistry of genes
  • Microorganism biochemistry
Research project
  • Core Research for Evolutional Science and Technology;Single Molecule and Atom Level Reactions
Information research report
  • (In Japanese)上野 仁之,鈴木 麻美絵,八波 利恵,山崎 勝弘,椙谷 康一,中村 聡. 新規ユウロピウム錯体を用いた大腸菌O157ベロ毒素遺伝子検出系の構築. 戦略的基礎研究推進事業 単一分子・原子レベルの反応制御 第4回シンポジウム —2期・3期チームの研究進捗— 講演要旨集,2000. p.38 - 38.

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