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(In Japanese)分子複合系の構築と機能 複合体形成に基づく膜タンパク質の機能制御

Research report code R990004298
Posted date Feb 6, 2001
Researchers
  • (In Japanese)橘 和夫
Affiliation
  • (In Japanese)東京大学大学院理学系研究科
Research organization
  • (In Japanese)東京大学大学院理学系研究科
Report name (In Japanese)分子複合系の構築と機能 複合体形成に基づく膜タンパク質の機能制御
Technology summary (In Japanese)ブレベトキシンを用いて,電位依存性ナトリウム・チャネルの再構成系に対する評価の有効性を検証し確認した。電気ウナギ発電器官よりチャネル蛋白質を抽出し,りん脂質であるアゾレクチンに再構築した。トリチウム化ブレベトキシンを用いた結合実験を行ったところ,1nMの解離定数での結合が認められた。カリウムイオン存在下で,再構成リポソームを調製,外液をナトリウムに変換後、カリウム特異的イオノフォアであるバリノマイシンを加えて,リポソーム膜内外に分極電圧を発生させた。ブレベトキシンを投与したところ脱分極が観測され,チャネル不活化剤であるテトロドトキシンにより阻害された。これは脱分極が、ブレベトキシンとチャネル蛋白質との結合によることを示す。マイトトキシン分子末端共役ジエン部でのDiels-Alder反応により,光反応性トリフルオロジアジリンを結合させ,検出用のビオチン構造を導入した。赤血球共存下で光照射したところ,光ラベルされた蛋白質が電気泳動上でのビオチン検出により認められた。
Research field
  • Function of cell components
  • Transport of cell membrane
  • Toxicity of animal derived substances
  • Biological function
Research project
  • Core Research for Evolutional Science and Technology;Creation and Functions of New Molecules and Molecular Assemblies
Information research report
  • (In Japanese)橘 和夫. 分子複合系の構築と機能 複合体形成に基づく膜タンパク質の機能制御. 戦略的基礎研究推進事業 平成10年度 研究年報,1999. p.569 - 572.

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