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COMPOSITION COMPRISING COMPOUND PROMOTING NUCLEIC ACID SYNTHESIS AND UTILIZATION THEREOF, AND METHOD FOR PRODUCING THE COMPOUND

Seeds code S110005818
Posted date Sep 30, 2011
Researchers
  • (In Japanese)甲元 一也
  • (In Japanese)杉本 直己
Name of technology COMPOSITION COMPRISING COMPOUND PROMOTING NUCLEIC ACID SYNTHESIS AND UTILIZATION THEREOF, AND METHOD FOR PRODUCING THE COMPOUND
Technology summary (In Japanese)本技術は、核酸合成における融解温度調整剤として優れる特定構造を有するベタインをはじめとする双性イオン化合物を簡便かつ効率的に製造できる方法およびこの化合物を含む組成物を提供し、高いGC含量のDNA領域の融解温度を低下させ、これまで困難であったDNA領域の合成を容易にするものである。そのベタインとしては、a)カチオンとアニオンとの間のスペーサー長がC3以上で、b)アンモニウムの置換基がC2以上であるベタインである。例としてEt3NあるいはN,N、N′、N′‐テトラメチルエチレンジアミンとブロモ酢酸エチルから前駆体1あるいは2の2‐(N,N,N‐トリエチルアンモニウム)‐酢酸エチルエステル臭化物塩、あるいは1,2‐ビス{[N,N‐ジメチル‐N‐(酢酸エチルエステル-2-イル)]-アンモニウム-N-イル}エタン二臭化物塩を得、これをさらに陰イオン交換カラム処理して対応するベタインを合成した。NaCl下、トリス緩衝溶液中で、DNA1にこれらのベタインを添加して融解温度の測定をその260nmの吸光度の変化から行った結果、スペーサ長が長くなるにつれ融解温度が低下することを認めた(図)。
Drawing

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thum_2007-270700.GIF
Research field
  • Aliphatic amines, imines, quaternary ammonium, immonium compounds
  • Nucleic acids in general
Seeds that can be deployed (In Japanese)DNAをはじめとする核酸の融解温度を降下する効果が高く、かつDNAポリメラーゼ等の核酸合成酵素を失活させない化合物を見出し、核酸合成の際に使用する組成物、核酸合成に使用するキット、並びに当該組成物を用いた核酸の変性方法および核酸の合成方法を提供することを目的とした。具体的には効率的なベタインをはじめとする双性イオン化合物の製造方法を提供する。
本発明の組成物は、DNAの融解温度を低下させる効果に関し、従来のその効果の高い融解温度調整剤グリシンベタインと比較して10倍以上の効果を有し、また、タンパク質を変性させないものである。よって、PCR等の核酸合成における融解温度調整剤の添加量を少なくすることができる。また、この組成物はDNAポリメラーゼ等の核酸合成酵素を失活させないために、核酸合成反応を効率よく、継続的に行うことができる。したがって、これまで困難であったGC含量の高い核酸領域を熱変性させることが可能となり、GC含量の高い核酸領域を効率よく合成することができる。
Usage Use field (In Japanese)核酸合成技術、核酸合成キット、双性イオン化合物、ベタイン
Application patent   patent IPC(International Patent Classification)
( 1 ) (In Japanese)学校法人甲南学園, . (In Japanese)甲元 一也, 杉本 直己, . COMPOSITION COMPRISING COMPOUND PROMOTING NUCLEIC ACID SYNTHESIS AND UTILIZATION THEREOF, AND METHOD FOR PRODUCING THE COMPOUND. P2009-096766A. May 7, 2009
  • C12N  15/09     
  • C12P  19/34     
  • C07C 227/08     
  • C07C 227/18     
  • C07C 229/10     
  • C07C 229/16     
  • C07C 227/40     
  • C07C 227/42     
  • C12Q   1/68     

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