Top > Quick Search > Search Technology seeds > METHOD FOR MONITORING BACTERIUM UTILIZING CHITINOUS SUBSTANCE DEGRADING ENZYME FOR GENE LABELING

METHOD FOR MONITORING BACTERIUM UTILIZING CHITINOUS SUBSTANCE DEGRADING ENZYME FOR GENE LABELING

Seeds code S130010496
Posted date Jun 6, 2013
Researchers
  • (In Japanese)眞山 滋志
  • (In Japanese)土佐 幸雄
  • (In Japanese)大津 康成
  • (In Japanese)豊田 秀吉
  • (In Japanese)桜谷 保之
  • (In Japanese)松田 克礼
  • (In Japanese)野々村 照雄
  • (In Japanese)瀧川 義浩
  • (In Japanese)森 裕文
Name of technology METHOD FOR MONITORING BACTERIUM UTILIZING CHITINOUS SUBSTANCE DEGRADING ENZYME FOR GENE LABELING
Technology summary (In Japanese)キチン質分解酵素遺伝子が導入された細菌に、該細菌に特異的なバクテリオファージを接触させる工程は、得られた細菌の細菌懸濁液に、精製したバクテリオファージを接種すればよい。バクテリオファージが感染することによって溶菌した細菌のライセートとキチン質分解酵素基質を反応させる工程では、前記細胞にバクテリオファージが感染することによって溶菌した結果、培地にキチン質分解酵素が迅速に放出されることとなり、キチン質分解酵素基質が切断される。この基質は、キチン質分解酵素で切断されると、蛍光性の4MUを放出する。基質の分解産物である4MUの蛍光を検出する工程は、4MUの蛍光を、たとえばUV照射によって可視的に検出すればよい。
Research field
  • Bioassay
  • Gene manipulation
  • Biological pest control
Seeds that can be deployed (In Japanese)温室トマトを荒らす植物食性のテントウムシのキチン質を分解することで、効果的に生物防除すべく、Enterobacter cloacae細菌にキチン質分解酵素遺伝子を導入した。Ent.cloacae特異的に感染するバクテリオファージを利用して、キチン質分解酵素遺伝子導入細菌をモニタリングするため、キチン質分解酵素であるキチナーゼおよびキトサナーゼ遺伝子をリポーターとして利用する標識細菌モニタリング法を開発することを目的とする。
本発明で、葉面細菌にキチナーゼ遺伝子を導入し、キチン質分解酵素遺伝子をトランスフォームした細菌にビルレントバクテリオファージを感染させて溶菌させてモニタリングする系を開発することが可能となった。このモニタリング系では、バクテリオファージが細菌に感染すると、溶解して培地にキチン質分解酵素が迅速に放出されるので、もとの細菌とトランスフォームされた細菌を容易、かつ迅速に区別することが可能となる。また、このバクテリオファージは、炭素源の非存在下においても感染するため、混入細菌の増殖を最小限にすることが可能となる。
Usage Use field (In Japanese)キチン質分解酵素を遺伝子標識に利用した細菌モニタリング技術
Application patent   patent IPC(International Patent Classification)
( 1 ) (In Japanese)国立大学法人神戸大学, . (In Japanese)眞山 滋志, 土佐 幸雄, 大津 康成, 豊田 秀吉, 桜谷 保之, 松田 克礼, 野々村 照雄, 瀧川 義浩, 森 裕文, . METHOD FOR MONITORING BACTERIUM UTILIZING CHITINOUS SUBSTANCE DEGRADING ENZYME FOR GENE LABELING. P2004-097032A. Apr 2, 2004
  • C12Q  1/04      
  • C12Q  1/34      
  • C12N 15/09      

PAGE TOP